Mir-449b mejora el estado epigenético de embrio-

nes transgénicos de búfalo producidos mediante

clonación artesanal

Gaurav Tripathi, Sonal Gupta, Ram Parsad, Tanya Gupta,

Naresh L. Selokar, Manoj Kumar Singh*

Laboratorio de Biotecnología de Embriones, División de

tos de miR-449b sobre el estado epigenético de embriones

transgénicos (que contienen el gen de la insulina humana) pro-

ducidos mediante clonación hecha a mano. Para esto, se enu-

clearon ovocitos madurados in vitro mediante microcuchilla, se

fusionaron dos demi-ooocitos con una célula somática (célu-

las transgénicas) mediante electrofusión y después de 1 h de

electrofusión, los embriones fusionados (reconstrucciones) se

incubaron en 40 nM de miR-449b imitador/inhibidor por método

de lipofección durante 1 h a 38,5°C en una incubadora de CO2.

Después de la incubación, los cigotos transfectados se activa-

sobre el estado epigenético se estudió mediante inmunouo-

rescencia y qPCR. Los embriones transgénicos mostraron un

patrón de desarrollo similar al de los embriones del grupo con-

trol. Se comparó el nivel global de 5-metilcitosina entre tres

grupos de embriones clonados transgénicos de búfalo produ-

cidos mediante el tratamiento de embriones reconstruidos con

Gaurav Tripathi, Sonal Gupta, Ram Parsad, Tanya Gupta,

The current study aimed to explore the e󰀨ects of miR-

449b on the epigenetic status of transgenic embryos (contain-

ing human insulin gene) produced through handmade cloning.

For this, in vitro matured oocytes were enucleated by micro-

blade, and two demi-oocytes were fused with a somatic cell

(transgenic cells) by electrofusion and after 1 h of electrofusion,

the fused embryos (reconstructs) were incubated in 40 nM miR-

449b mimic/inhibitor by lipofection method for 1 h at 38.5°C

in a CO2 incubator. After incubation, transfected zygotes were

chemically activated and subjected to in vitro culture in RVCL

ic embryos showed a similar development pattern as control

embryos. The global level of 5-methyl cytosine was compared

duced by treatment of reconstructed embryos with miR-449b

control, mimic, and inhibitor. It was found that the mean pixel

intensity was signicantly reduced (p<0.05) when reconstruct-

ed embryos were cultured for 2 h with miR-449b mimic as com-

pared to control (mimic 7.92 ± 0.34 vs control 16.15 ± 0.50).

with miR-449b mimic. At the same time, in the case of miR-

449b inhibitor, the expression level of HDAC 1 gene was sig-

nicantly higher (p<0.05) up to 4.89±0.39 fold compared to the

control. However, in the case of DNMT1, there was no signif-

icant di󰀨erence (p<0.05) 1.17±0.66 fold compared to control

global methylation level of bu󰀨alo transgenic cloned embryos,

hence improving developmental competence and quality.

cuando los embriones reconstruidos se expusieron al inhibidor

de miR-449b en comparación con el control (inhibidor 17,18 ±

0,88 frente al control 16,15 ± 0,50). El nivel de expresión relati-

vo de HDAC1 y DNMT1 se redujo signicativamente (p<0,05),

hasta 0,33 ± 0,39 veces y 0,16 ± 0,74 veces, respectivamente,

en comparación con el control cuando se trató con el imitador

de miR-449b. Al mismo tiempo, en el caso del inhibidor de miR-

449b, el nivel de expresión del gen HDAC1 fue signicativa-

mejorando así la competencia y la calidad del desarrollo.