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______________________________________________________ Revista Cientíca, FCV-LUZ / Vol. XXXIII, Supl. Esp., 279 - 291, 2023

BIOTECHNOLOGY & OMICS TECHNOLOGIES

Biotecnología y Tecnologías Ómicas

E󰀨ect of custom-designed transfection bu󰀨er

on delivery of genome modication compo-

nents into primary cells of bu󰀨alo, cattle, goats,

and sheep

Shreya Malhotra, Priyanka Singh, Aseem Tara,

Bosco Jose, Devika Gautam, Ram Prasad,

Gaurav Tripathi, Sacchinandan De, Naresh L. Selokar*

Animal Biotechnology Division (ABTD), ICAR-National Dairy

Research Institute, Karnal, Haryana, 132001

*Corresponding author: Naresh L. Selokar (naresh.selokar@icar.gov.in).

ABSTRACT

The transfer of genome-modication components into

farm animal cells is indispensable for the production of ge-

nome-modied and transgenic farm animals. Electroporation

is a physical transfection method when appropriately used;

this technique is safe, simple to use, a󰀨ordable, and e󰀩cient

in transfecting cells from several lineages. Electroporation e󰀩-

ciency depends on various physical parameters, of which cell

type is considered a major factor for transfection e󰀩ciency. Pri-

mary cells are generally less susceptible to transfection than

other cell types due to their nite lifespan and limited expansion

capacity. Previously, we custom-designed a transfection buf-

fer to deliver exogenous genetic components into mammalian

cells. In the present study, we examined the e󰀨ect of the de-

veloped bu󰀨er on transfection rates and cell viability of primary

somatic cells from bu󰀨alo, cattle, goats, and sheep. To achieve

the aims of this study, t primary somatic cells from skin biopsies

were established and were transfected with a Venus-expres-

sion vector (pAcGFPs-Venus). We noticed that transfection

rates of pAcGFPs-Venus were 22.51%, 17.56%, 22.81%, and

16.16% for bu󰀨alo, cattle, goats, and sheep cells, respectively.

We also noticed that cell viability and proliferation rates were

better in the case of goats, sheep, and cattle cells; also, these

cells have less vacuolation than bu󰀨alo cells. In addition, we

also generated MSTN (myostatin) KO (Knockout) cell clones

from these cell populations, in which the e󰀩ciency of single-cell

clone generation was high for goats and sheep cells. In conclu-

sion, our lab-made transfection bu󰀨er can be e󰀩ciently used to

Efecto del tampón de transfección diseñado a me-

dida en la administración de componentes de mo-

dicación del genoma en células primarias de búfa-

los, ganado vacuno, cabras y ovejas

Shreya Malhotra, Priyanka Singh, Aseem Tara,

Bosco Jose, Devika Gautam, Ram Prasad,

Gaurav Tripathi, Sacchinandan De, Naresh L. Selokar*

División de Biotecnología Animal (ABTD), ICAR-Instituto

Nacional de Investigación Láctea, Karnal, Haryana, 132001

*Autor de correspondencia: Naresh L. Selokar (naresh.selokar@icar.gov.in).

RESUMEN

La transferencia de componentes de modicación del

genoma a células de animales de granja es indispensable para

la producción de animales de granja transgénicos y con el ge-

noma modicado. La electroporación es un método de trans-

fección física cuando se utiliza adecuadamente. Esta técnica

es segura, sencilla de utilizar, asequible y ecaz para transfec-

tar células de varios linajes. La eciencia de la electroporación

depende de varios parámetros físicos, de los cuales el tipo de

célula se considera un factor importante para la eciencia de

la transfección. Las células primarias son generalmente menos

susceptibles a la transfección que otros tipos de células debi-

do a su vida útil nita y su capacidad de expansión limitada.

Anteriormente, diseñamos un tampón de transfección perso-

nalizado para administrar componentes genéticos exógenos a

células de mamíferos. En el presente estudio, examinamos el

efecto del tampón desarrollado sobre las tasas de transfección

y la viabilidad celular de células somáticas primarias de búfa-

los, bovinos, caprinos y ovinos. Para lograr los objetivos de

este estudio, se establecieron células somáticas primarias de

biopsias de piel y se transfectaron con un vector de expresión

de Venus (pAcGFPs-Venus). Notamos que las tasas de trans-

fección de pAcGFPs-Venus fueron 22,51%, 17,56%, 22,81%

y 16,16% para células de búfalo, ganado vacuno, cabras y

ovejas, respectivamente. También notamos que la viabilidad

celular y las tasas de proliferación eran mejores en el caso de

células de cabras, ovejas y vacunos; además, estas células

tienen menos vacuolización que las células de búfalo. También

BOT-115 Rev. Cientif. FCV-LUZ, XXXIII, SE, 279-280, 2023, https://doi.org/10.52973/rcfcv-wbc123