______________________________________________________ Revista Cientíca, FCV-LUZ / Vol. XXXIII, Supl. Esp., 240 - 278, 2023

Ovarian stimulation alternatives for in vitro pro-

duction of embryos in water bu󰀨aloes

Bandeo, Alexis1,2; Konrad, José Luis1,2; Vallejos, Natalia1;

Ponce, Pablo1,2; Sansinena, Marina J.2,4,5;

Crudeli, Gustavo6; Maldonado-Vargas, Pablo1

Nordeste (UNNE), Corrientes, Argentina.

Currently, one of the most promising tools to increase the

number of transferable embryos in bu󰀨aloes is in vitro produc-

tion (IVP). However, IVP still has certain limitations that pre-

vent its optimal e󰀩ciency for commercial application. One of

these limitations is the reduced number and low competence

of oocytes obtained from transvaginal follicular aspiration in

subsequent embryo production. This eld study was conducted

at the Pedro Antonio Silva bu󰀨alo farm, located in the General

Paz department, Province of Corrientes, in 2021. A total of 60

OPU sessions were performed on Murrah and Mediterranean

breed donors, and four ovarian stimulation treatments were ap-

plied. Treatment (TRT) 1, which was used as control (n=20),

consisted of a day 0 insertion of an intravaginal progesterone

device (IP) + 2 mg estradiol benzoate (EB) i.m., with OPU per-

formed on day 7. Treatment (TRT) 2 (n=10) consisted of day

0 insertion of IP + 2 mg EB, followed by four applications of

day 7; Treatment (TRT) 4 (n=10) consisted of day 0 insertion

of IP + EB, followed by day 4 application of 2500 IU of serum

eCG (Ecegon®) i.m., OPU was performed 72 hours later. Prior

Bandeo, Alexis1,2; Konrad, José Luis1,2; Vallejos, Natalia1;

Ponce, Pablo1,2; Sansinena, Marina J.2,4,5,

Crudeli Gustavo6; Maldonado-Vargas, Pablo1

Nordeste (UNNE), Corrientes, Argentina.

Actualmente, una de las herramientas más prometedo-

ras para aumentar el número de embriones transferibles en

búfalas es la producción in vitro (PIVE). Sin embargo, la PIVE

todavía tiene ciertas limitaciones que limitan su eciencia para

aplicaciones comerciales. Una de estas limitaciones es el nú-

mero reducido y la baja competencia de los ovocitos obtenidos

nal en donantes bufalinas, su efecto sobre la calidad de los

ovocitos y la posterior producción de embriones. Este estudio

de campo se realizó en el criadero de búfalos Pedro Antonio

Silva, ubicado en el departamento General Paz, Provincia de

Corrientes, durante el año 2021. Se realizaron un total de 60

sesiones de OPU a donantes de raza Murrah y Mediterránea,

y cuatro tratamientos de estimulación ovárica se aplicaron. El

tratamiento (TRT) 1, que se utilizó como control (n=20), con-

sistió en la inserción el día 0 de un dispositivo de progesterona

intravaginal (IP) + 2 mg de benzoato de estradiol (EB) por vía

tratamiento (TRT) 3 (n=20) consistió en la inserción de IP + EB

el día 0, seguida de una aplicación el día 4 de 1050 UI de eCG

recombinante (FoliRec®) i.m., la OPU se realizó el día 7; El tra-

to each follicular aspiration, antral follicles were counted using

a portable ultrasound with a linear probe (Mindray, DP30-Vet)

and classied into small (≥3mm Ø), medium (4-8 mm Ø), and

large (>8mm Ø) follicles. The aspirated oocytes or COCs (cu-

mulus-oocyte complexes) were classied into grades (1 to 4)

were graded and vitried. Descriptive statistics and analysis

of variance were conducted on the obtained data, considering

population and follicular size, quantity and quality of oocytes,

and embryo production, with a signicance level (α) of 5%. The

total observed follicular population did not di󰀨er among treat-

ments (p>0.05). However, stimulation in TRT2 (FSH) and TRT4

(serum eCG) increased the proportion of medium-sized folli-

cles (4-8mm) available for OPU (p<0.05), which correlates with

better quality. In comparison, the control group had the high-

est number of small follicles (<3mm). The number of collected

respectively) (p<0.05). No signicant di󰀨erence was found in

the number of zygotes (CIV) between treatments (p<0.05),

and cleavage was higher in TRT3 (p<0.05). In conclusion, this

study has shown that ovarian super stimulation before OPU

increases the proportion of medium-sized follicles available

for the aspiration procedure, resulting in a higher proportion of

viable oocytes. This e󰀨ect is mainly achieved using FSH and

serum eCG. Stimulation with FSH also resulted in higher rates

of blastocysts and embryos produced per OPU session. These

are promising for the advancement of the OPU/IVP technique

IP + EB, seguida de la aplicación del día 4 de 2500 UI de eCG

sérico (Ecegon®) por vía intramuscular; la OPU se realizó 72

horas después. Antes de cada aspiración folicular, los folículos

antrales se contaron mediante un ultrasonido portátil con son-

da lineal (Mindray, DP30-Vet) y se clasicaron en pequeños (≥3

mm Ø), medianos (4-8 mm Ø) y grandes (>8 mm Ø) folículos.

Los ovocitos aspirados o COCs (complejos cúmulo-ovocito) se

clasicaron en grados (1 a 4) según el número de capas de cú-

mulo presentes, según el método de la Sociedad Internacional

de Transferencia de Embriones (Manual IETS). La fertilización

sis de varianza, considerando tamaño poblacional y folicular,

cantidad y calidad de ovocitos y producción de embriones, con

un nivel de signicancia (α) del 5%. La población folicular total

observada no dirió entre tratamientos (p>0.05). Sin embar-

go, la estimulación en TRT2 (FSH) y TRT4 (eCG sérica) au-

mentó la proporción de folículos de tamaño mediano (4-8 mm)

disponibles para OPU (p<0,05), lo que se correlaciona con

una mejor calidad. En comparación, el grupo de control tuvo

la mayor cantidad de folículos pequeños (<3 mm). El número

de ovocitos recolectados por OPU no varió entre tratamientos

No se encontró diferencia signicativa en el número de cigo-

tos (CIV) entre tratamientos (p<0,05), y la escisión fue mayor

en TRT3 (p<0,05). En conclusión, este estudio ha demostrado

que la superestimulación ovárica antes de la OPU aumenta la

proporción de folículos de tamaño mediano disponibles para

el procedimiento de aspiración, lo que resulta en una mayor

proporción de ovocitos viables. Este efecto se logra principal-

mente utilizando FSH y eCG sérico. La estimulación con FSH

también resultó en tasas más altas de blastocistos y embriones

producidos por sesión de OPU. Estos son prometedores para