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13th World Bualo Congress ~ 13er Congreso Mundial de Búfalos / Posters / Animal Health & One Health ___________________________
Identicación molecular de Leptospira spp. en
muestras de orina de búfalas de agua hembras.
Resultados preliminares
Rosaura Pérez-Gil 1*, Hector Nava-Trujillo2
1 Centro Diagnóstico Veterinario Rosaura Pérez-Gil, Araure,
Venezuela.
2 División de Ciencias Animales, Universidad de Missouri,
Columbia MO, EE. UU.
*Autor de correspondencia: rperezgil@gmail.com
RESUMEN
La leptospirosis animal es una enfermedad zoonótica
que afecta a múltiples especies domésticas y salvajes. Pro-
voca vasculitis generalizada, que en mujeres embarazadas
provoca placentitis y desencadena el aborto. Además, provoca
hemoglobinuria, ictericia y congestión en diferentes mucosas.
El objetivo de este estudio fue establecer si la aparición de he-
moglobinuria y cambios en la pigmentación de la mucosa vagi-
nal se asociaban con la presencia de Leptospira spp. ADN en
la orina. Por lo tanto, se evaluaron 38 muestras de orina de bú-
falas lactantes que mostraron hemoglobinuria, alteraciones en
la pigmentación de la mucosa vaginal, antecedentes de aborto
y terneros de bajo peso. Además, el hematocrito se determinó
Molecular identication of Leptospira spp. in
urine samples from female water bualoes. Pre-
liminary results
Rosaura Pérez-Gil 1*, Héctor Nava-Trujillo2
1 Centro Diagnóstico Veterinario Rosaura Pérez-Gil, Araure,
Venezuela.
2 Division of Animal Sciences, University of Missouri,
Columbia MO, USA
*Corresponding author: rperezgil@gmail.com
ABSTRACT
Animal leptospirosis is a zoonotic disease that aects
multiple domestic and wild species. It causes generalized vas-
culitis, which in pregnant females results in placentitis and trig-
gers abortion. Furthermore, it causes hemoglobinuria, icterus
(jaundice), and congestion in dierent mucosa. The objective
of this study was to establish whether the occurrence of he-
moglobinuria and changes in the pigmentation of the vaginal
mucosa was associated with the presence of Leptospira spp.
DNA in the urine. Therefore, 38 urine samples from lactating
female bualoes showing hemoglobinuria, alterations in the
pigmentation of the vaginal mucosa, history of abortion, and
low-weight calves were evaluated. Additionally, hematocrit
AHOH-233 Rev. Cientif. FCV-LUZ, XXXIII, SE, 238-239, 2023, https://doi.org/10.52973/rcfcv-wbc093
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______________________________________________________ Revista Cientíca, FCV-LUZ / Vol. XXXIII, Supl. Esp., 213 - 239, 2023
was determined by blood centrifugation in a capillary tube, and
the presence of hemoparasites was determined by staining of
blood smears. The DNA of Leptospira spp. was detected by
PCR using two pairs of primers for the markers G1-G2, derived
from a sequence from the genomic library of L. interrogans se-
rovar icterohaemorragiae, strain RGA, which was described by
Gravekamp et al. (1993). Additionally, Internal 1 and Internal
2 were derived from the sequence of the gene encoding the
LipL32 protein and specic to identify pathogenic leptospira,
described by Haake et al. (2000). Data analysis was performed
with R (Fisher’s exact test). The hematocrit mean was 21%, and
all females were negative for hemoparasites (Anaplasma mar-
ginale, Babesia spp., and Trypanosoma spp.). The percentage
of Leptospira spp. DNA-positive samples with at least one of
the markers used was 63%. The marker G1-G2 detected more
positive samples in comparison with the marker Internal 1-In-
ternal 2 (60.5% vs 7.9%, p<0.0001 respectively). A signicant
association was observed between the mucosa’s appearance
and the presence of Leptospira spp. DNA in urine when the
G1-G2 was used (p <0.0001). In the case of females with icter-
ic vaginal mucosa, the percentage of positive samples (85%,
17/20, p = 0.001227) was higher than that in bualoes with nor-
mal mucosa (26.66%, 4/15). In addition, in females with icteric
vaginal mucosa, the odds of a positive sample for Leptospira
spp. DNA (using the G1-G2 marker) were 14 (95% CI: 2.3427-
119.1974) times more than in females with normal vaginal mu-
cosa. There was no signicant dierence in the percentage of
positive samples between bualoes grouped as icteric mucosa,
and congestive mucosa (p= 0.4529), nor between the females
grouped as congestive and normal mucosa (p= 0.2451). When
the Internal 1-2 marker was used, there was no association
between the appearance of the mucosa and the percentage
of bualoes with Leptospira spp. DNA in the urine (p= 0.1714).
The presence of hemoglobinuria was not associated with Lep-
tospira spp. DNA in the urine, regardless of the marker used for
its detection (p>0.05). In conclusion, the data from this study
indicates that the G1-G2 marker was more ecient in deter-
mining the presence of Leptospira spp. DNA in urine, and using
this marker, the icteric vaginal mucosa is associated with Lep-
tospira spp. DNA in urine, thus suggesting that this clinical sign
should be considered suggestive of the disease.
Keywords: Leptospira, PCR, icterus, water bualoes.
mediante centrifugación de la sangre en un tubo capilar y la
presencia de hemoparásitos se determinó mediante tinción de
frotis de sangre. El ADN de Leptospira spp. se detectó median-
te PCR utilizando dos pares de cebadores para los marcadores
G1-G2, derivados de una secuencia de la biblioteca genómica
de L. interrogans serovar icterohaemorragiae, cepa RGA, que
fue descrita por Gravekamp et al. (1993). Además, Internal 1 e
Internal 2 se derivaron de la secuencia del gen que codica la
proteína LipL32 y son especícos para identicar leptospiras
patógenas, descrito por Haake et al. (2000). El análisis de los
datos se realizó con R (prueba exacta de Fisher). La media
del hematocrito fue del 21% y todas las hembras resultaron
negativas para hemoparásitos (Anaplasma marginale, Babesia
spp. y Trypanosoma spp.). El porcentaje de muestras de ADN
Leptospira spp. positivas con al menos uno de los marcadores
utilizados fue del 63%. El marcador G1-G2 detectó más mues-
tras positivas en comparación con el marcador Interno 1-Inter-
no 2 (60,5% vs 7,9%, p<0,0001 respectivamente). Se observó
una asociación signicativa entre la apariencia de la mucosa y
la presencia de ADN de Leptospira spp. en la orina cuando se
utilizó el G1-G2 (p<0,0001). En el caso de hembras con muco-
sa vaginal ictérica, el porcentaje de muestras positivas (85%,
17/20, p = 0,001227) fue mayor que en búfalas con mucosa
normal (26,66%, 4/15). Además, en hembras con mucosa va-
ginal ictérica, las probabilidades de una muestra positiva para
ADN de Leptospira spp. (utilizando el marcador G1-G2) fue 14
(IC 95%: 2,3427-119,1974) veces más que en hembras con
mucosa vaginal normal. No hubo diferencia signicativa en el
porcentaje de muestras positivas entre las búfalas agrupadas
como mucosa ictérica y mucosa congestiva (p= 0,4529), ni en-
tre las hembras agrupadas como mucosa congestiva y normal
(p= 0,2451). Cuando se utilizó el marcador Interno 1-2 no hubo
asociación entre la apariencia de la mucosa y el porcentaje
de búfalos con Leptospira spp. ADN en orina (p= 0,1714). La
presencia de hemoglobinuria no se asoció con Leptospira spp.
ADN en orina, independientemente del marcador utilizado para
su detección (p>0,05). En conclusión, los datos de este estudio
indican que el marcador G1-G2 fue más eciente para determi-
nar la presencia de Leptospira spp. ADN en orina, y utilizando
este marcador, se asocia la mucosa vaginal ictérica con Lep-
tospira spp. ADN en orina, lo que sugiere que este signo clínico
debe considerarse sugestivo de la enfermedad.
Palabras clave: Leptospira, PCR, ictericia, búfalos de agua.
