228
13th World Bualo Congress ~ 13er Congreso Mundial de Búfalos / Posters / Animal Health & One Health ___________________________
Assessment tuberculin skin test specicity in
water bualo using ve dierent antigens
Alessandra Martucciello1, Francesco Napolitano2,
Piera Mazzone3, Francesco Grandoni 2,
Maria Beatrice Boniotti4, Monica Cagiola3,
Gabriele Di Vuolo1*, Felice Gerardo Giglio5,
Francesco Grippa5, Giorgio Galiero1, Federica Signorelli2,
Esterina De Carlo1
1 National Reference Centre for Hygiene and Technology
of Breeding and Buffalo Production, Istituto Zooprolattico
Sperimentale del Mezzogiorno, Salerno, Italy.
2 Council for Agricultural Research and Economics - Animal
Production and Aquaculture, Monterotondo, Italy.
3 Istituto Zooprolattico Sperimentale dell’Umbria e delle
Marche “Togo Rosati”, Perugia, Italy.
4 Tuberculosis, Istituto Zooprolattico Sperimentale della
Lombardia e dell’Emilia Romagna, Brescia, Italy, (5) Azienda
Sanitaria Locale Salerno, Salerno, Italy.
*Corresponding author: gabriele.divuolo@izsmportici.it
ABSTRACT
Tuberculosis (TB) control involves “test and cull strat-
egies”. The primary diagnostic test is the tuberculin skin test
(TST) which requires intradermal inoculation with specic My-
cobacterium bovis antigens, bovine tuberculin (PPDB) in the
single intradermal reaction test (SIT) and avian tuberculin
(PPDA) in the comparative intradermal reaction test (SICT).
Using other antigens susch as 6 kDa early secretory antigenic
target (ESAT-6), 10 kDa culture ltrate protein (CFP-10) and
Early Secretory Proteins (ESP) could increase test specicity.
Therefore, this study aims to evaluate the specicity of TST
using ve dierent antigens. A total of 100 bualoes from 3 TB
free Italian herds were enrolled. Five intradermal injection sites
on the animal’s shoulder (three on the right and two on the left
side) were used on each animal, with a volume of 0.1 mL for all
antigens (ESAT-6 and CFP-10 at 20 µg/mL, ESP at 100 µg/mL,
PPDA and PPDB at 100 µg/mL), and PBS as negative control.
Skin reactions were measured using calipers. Results were
expressed in millimeters as the dierence between the two
measurements, i.e., before and 72h after the inoculation of tu-
berculin. The reaction was considered positive if skin thickness
increased by ≥ 4mm, doubtful if >2 and <4mm, and negative
if ≤ 2 mm. All 100 bualoes were also submitted to the gam-
ma-interferon (IFN-γ) test to conrm TB negativity. Of the 100
negative subjects, 31 gave doubtful SIT results to PPDB while
the number of doubtful subjects decreased to 11 with the SICT.
The number of doubtful results with ESP stimulation was 26
and with the ESAT-6 and CFP-10 protein cocktail, it was 21. If
we introduce the responses to stimulation with ESP and ESAT-
Evaluación de la especicidad de la prueba cutá-
nea de tuberculina en búfalos de agua utilizando
cinco antígenos diferentes
Alessandra Martucciello1, Francesco Napolitano2,
Piera Mazzone3, Francesco Grandoni2,
Maria Beatrice Boniotti4, Monica Cagiola3,
Gabriele Di Vuolo1*, Felice Gerardo Giglio5,
Francesco Grippa5, Giorgio Galiero1, Federica Signorelli2,
Esterina De Carlo1
1 Centro Nacional de Referencia para Higiene y Tecnología
de la Cría y Producción de Búfalos, Istituto Zooprolattico
Sperimentale del Mezzogiorno, Salerno, Italia.
2 Consejo de Investigación y Economía Agrícola - Producción
Animal y Acuicultura, Monterotondo, Italia.
3 Istituto Zooprolattico Sperimentale dell’Umbria e delle
Marche “Togo Rosati”, Perugia, Italia.
4 Tuberculosis, Istituto Zooprolattico Sperimentale della
Lombardia e dell’Emilia Romagna, Brescia, Italia, (5) Azienda
Sanitaria Locale Salerno, Salerno, Italia.
*Autor de correspondencia: gabriele.divuolo@izsmportici.it
RESUMEN
El control de la tuberculosis (TB) implica “estrategias de
prueba y eliminación”. La prueba de diagnóstico primaria es la
prueba cutánea de la tuberculina (TST), que requiere la inocula-
ción intradérmica con antígenos especícos de Mycobacterium
bovi, la tuberculina bovina (PPDB) en la prueba de reacción in-
tradérmica única (SIT) y la tuberculina aviar (PPDA) en la prue-
ba de reacción intradérmica comparativa (SICT). El uso de otros
antígenos como prueba antigénica secretora temprana de 6 kDa
(ESAT-6), proteína ltrada de cultivo de 10 kDa (CFP-10) y pro-
teínas secretoras tempranas (ESP) podría aumentar la especi-
cidad de la prueba. Por tanto, este estudio tiene como objetivo
evaluar la especicidad de la TST utilizando cinco antígenos di-
ferentes. Se inscribieron un total de 100 búfalos de 3 rebaños
italianos libres de tuberculosis. En cada animal se utilizaron cinco
sitios de inyección intradérmica en el hombro del animal (tres en
el lado derecho y dos en el lado izquierdo), con un volumen de
0,1 ml para todos los antígenos (ESAT-6 y CFP-10 a 20 µg/ml,
ESP a 100 µg/mL, PPDA y PPDB a 100 µg/mL) y PBS como
control negativo. Las reacciones cutáneas se midieron utilizando
calibradores. Los resultados se expresaron en milímetros
como la diferencia entre las dos mediciones, es decir, antes y
72 h después de la inoculación de tuberculina. La reacción se
consideró positiva si el espesor de la piel aumentaba ≥ 4 mm,
dudosa si > 2 y < 4 mm, y negativa si ≤ 2 mm. Los 100 búfalos
también fueron sometidos a la prueba de interferón gamma
(IFN-γ) para conrmar la negatividad de la tuberculosis. De los
100 sujetos negativos, 31 dieron resultados dudosos del SIT al
AHOH-195 Rev. Cientif. FCV-LUZ, XXXIII, SE, 228-229, 2023, https://doi.org/10.52973/rcfcv-wbc086
229
______________________________________________________ Revista Cientíca, FCV-LUZ / Vol. XXXIII, Supl. Esp., 213 - 239, 2023
6 and CFP-10 protein cocktail combined with the interpretation
of SICT, the 11 doubtful results would be reduced to 5 and 4,
respectively. The doubtful outcomes of SIT and SICT found in
negative animals with PPDB and PPDA stimulation, could be
due to non-specic responses. In bualo, this non-specicity
could be due to atypical mycobacterial infections as well as to
the peculiarities of bualo skin structure compared to bovine
skin (e.g., dermis thickness). Regarding ESAT-6 and CFP-10
protein cocktail and ESP, they induced fewer non-specic re-
actions, and thus, they could be used in SICT in association
with traditional PPDs. Due to the IFN-γ test, we excluded the
presence of anergic subjects, since all 100 subjects reacted to
stimulus with the mitogen. Furthermore, the IFN-γ test in the
same animals gave negative results according to the interpre-
tation criteria of the ocial EU IFN-γ test, even if with slight
non-specic reactions, but excluding false-positive results.
Keywords: water bualo, tuberculosis diagnosis, tuberculin
skin test, specicity.
Acknowledgments: This work was supported by RC IZSME
09/19 Financed by the Italian Ministry of Health.
PPDB mientras que el número de sujetos dudosos disminuyó a 11
con el SICT. El número de resultados dudosos con estimulación
ESP fue de 26 y con cóctel de proteínas ESAT-6 y CFP-10 fue
de 21. Si introducimos las respuestas a la estimulación con
ESP y cóctel de proteínas ESAT-6 y CFP-10 combinado con la
interpretación de SICT, los 11 resultados dudosos se reducirían
a 5 y 4, respectivamente. Los resultados dudosos de SIT y SICT
encontrados en animales negativos con estimulación PPDB y
PPDA, podrían deberse a respuestas no especícas. En búfalo,
esta inespecicidad podría deberse a infecciones micobacterianas
atípicas, así como a las peculiaridades de la estructura de la piel
del búfalo en comparación con la del bovino (por ejemplo, grosor
de la dermis). En cuanto al cóctel de proteínas ESAT-6 y CFP-10
y ESP, indujeron menos reacciones no especícas y, por lo tanto,
podrían usarse en SICT en asociación con los PPD tradicionales.
Debido a la prueba de IFN-γ excluimos la presencia de sujetos
anérgicos, ya que los 100 sujetos reaccionaron al estímulo con el
mitógeno. Además, la prueba de IFN-γ en los mismos animales
arrojó resultados negativos según los criterios de interpretación
de la prueba ocial de IFN-γ de la UE, aunque con ligeras
reacciones inespecícas, pero excluyendo los resultados falsos
positivos.
Palabras clave: búfalo de agua, diagnóstico de tuberculosis,
prueba cutánea de tuberculina, especicidad.
Agradecimientos: Este trabajo fue apoyado por RC IZSME
09/19 Financiado por el Ministerio de Salud italiano.
