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______________________________________________________ Revista Cientíca, FCV-LUZ / Vol. XXXIII, Supl. Esp., 213 - 239, 2023
Experimental use of mycobacterial antigens in 
tuberculin skin test on water bualo
Alessandra Martucciello1, Federica Signorelli 2,  
Piera Mazzone3, Francesco Grandoni 2,  
Giovanna Cappelli 1*, Lucia Boccia4, Giuseppe Parente4, 
Monica Cagiola3, Maria Beatrice Boniotti 5,  
Esterina De Carlo1, Francesco Napolitano2,  
Giorgio Galiero1
1 National Reference Centre for Hygiene and Technology 
of Breeding and Buffalo Production, Istituto Zooprolattico 
Sperimentale del Mezzogiorno, Salerno, Italy.
2 Council for Agricultural Research and Economics - Animal 
Production and Aquaculture, Monterotondo, Italy.
3 Istituto Zooprolattico Sperimentale dell’Umbria e delle 
Marche “Togo Rosati”, Perugia, Italy.
4 Azienda Sanitaria Locale Salerno, Salerno, Italy.
5 National Reference Centre for Bovine Tuberculosis, Istituto 
Zooprolattico Sperimentale della Lombardia e dell’Emilia 
Romagna, Brescia, Italy.
*Corresponding author: Giovanna Cappelli
(giovanna.cappelli@izsmportici.it).
ABSTRACT
In Italy, bovine tuberculosis (TB) control in the water buf-
falo population is mainly carried out using the tuberculin skin 
test  (TST). The  test  measures  the  increase in  skin  thickness 
72 hours (h) after the intradermal injection of mycobacterial pu-
ried protein derivatives (PPD). The TST can involve the single 
intradermal test with bovine PPD (PPDB), or the comparative 
test  adding  a  second  injection  with  avian  tuberculin  (PPDA), 
using  the  couple  of  PPDs  reduces  false  positives  caused  by 
non-tuberculosis mycobacteria. This pilot study aimed to eval-
uate the potential use of PPDB, PPDA, along with 6 kDa early 
secretory antigenic target (ESAT-6), 10 kDa culture ltrate pro-
tein (CFP-10), and Early Secretory Proteins (ESP) in the TST, 
in healthy and naturally TB infected bualoes. Twenty-one buf-
faloes, gamma-interferon (IFN-γ) test positive, from a TB-out-
break herd and 11 bualoes from a TB-free herd were select-
ed. All subjects were also submitted to the IFN-γ test using the 
same antigens (Ag) as the TST to verify the cellular response 
in vitro and to exclude anaergic animals that did not respond to 
in vitro stimulation with the mitogen. The TST was performed 
according to the TB Italian National eradication program, and to 
Reg. EU 2020/689. Eight intradermal injection sites were used 
on each animal shoulder (4 on the right and 4 on the left side). 
Three concentrations of the ESAT6-CFP10 protein cocktail (10, 
20 and 30 µg) and two of ESP (50 and 100 µg) were inoculated. 
PPDB and PPDA were always included in the TST, along with 
PBS as  negative  control.  Skin  reactions were measured  with 
Uso  experimental  de  antígenos  micobacterianos 
en la prueba cutánea de tuberculina en búfalos de 
agua
Alessandra Martucciello1, Federica Signorelli2,  
Piera Mazzone3, Francesco Grandoni2,  
Giovanna Cappelli1*, Lucia Boccia4, Giuseppe Parente4, 
Monica Cagiola3, Maria Beatrice Boniotti5,  
Esterina De Carlo1, Francesco Napolitano2,  
Giorgio Galiero1
1 Centro Nacional de Referencia para la Higiene y Tecnología 
de la Cría y Producción del Búfalo, Istituto Zooprolattico 
Sperimentale del Mezzogiorno, Salerno, Italia.
2 Consejo de Investigación y Economía Agrícola - Producción 
Animal y Acuicultura, Monterotondo, Italia.
3 Istituto Zooprolattico Sperimentale dell’Umbria e delle 
Marche “Togo Rosati”, Perugia, Italia.
4 Azienda Sanitaria Locale Salerno, Salerno, Italia.
5 Centro Nacional de Referencia para la Tuberculosis Bovina, 
Istituto Zooprolattico Sperimentale della Lombardia e 
dell’Emilia Romagna, Brescia, Italia.
*Autor de correspondencia: Giovanna Cappelli
(giovanna.cappelli@izsmportici.it).
RESUMEN
En Italia, el control de la tuberculosis bovina (TB) en la 
población de búfalos de agua se lleva a cabo principalmente 
mediante la prueba cutánea de la tuberculina (PT). La prueba 
mide  el  aumento  del  grosor  de  la  piel  72  horas  (h)  después 
de la inyección intradérmica de derivados proteicos puricados 
(PPD) de micobacterias. La PT puede implicar la prueba intra-
dérmica única con PPD bovino (PPDB), o la prueba compara-
tiva  añadiendo  una  segunda  inyección  con  tuberculina  aviar 
(PPDA). El uso de un par de PPD reduce los falsos positivos 
causados por micobacterias no tuberculosas. Este estudio pilo-
to tuvo como objetivo evaluar el uso potencial de PPDB, PPDA, 
junto con un objetivo antigénico secretorio temprano de 6 kDa 
(ESAT-6), una proteína ltrada de cultivo de 10 kDa (CFP-10) 
y proteínas secretoras tempranas (ESP) en la TST, en búfalos 
sanos y naturalmente infectados con tuberculosis. Se seleccio-
naron veintiún búfalos con resultados positivos para interferón 
gamma  (IFN-γ)  de  un  rebaño  con brote  de  tuberculosis y  11 
búfalos de  un rebaño libre  de tuberculosis. Todos  los sujetos 
también fueron sometidos a la prueba de IFN-γ utilizando los 
mismos antígenos (Ag) que la TST para vericar la respuesta 
celular in vitro y excluir animales anaérgicos que no respondie-
ron a la estimulación in vitro con el mitógeno. La PT se realizó 
según el programa nacional italiano de erradicación  de la tu-
berculosis y el Reg. UE 2020/689. Se utilizaron ocho sitios de 
inyección intradérmica en cada hombro de animal (4 en el lado 
AHOH-175      Rev. Cientif. FCV-LUZ, XXXIII, SE, 225-226, 2023, https://doi.org/10.52973/rcfcv-wbc084