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______________________________________________________ Revista Cientíca, FCV-LUZ / Vol. XXXIII, Supl. Esp., 213 - 239, 2023
El uso del cultivo bacteriano para el diagnóstico de
Leptospirosis en búfalas de agua hembras
Rosaura Pérez-Gil1*, Oriana Gavidia1, Juan Torres2
1Centro Diagnóstico Veterinario Rosaura Pérez-Gil, Araure,
Venezuela.
2Clínica Bovina, Venezuela.
*Corresponding author: Pérez-Gil, Rosaura (rperezgil@gmail.com).
RESUMEN
La prueba más utilizada para el diagnóstico de leptos-
pirosis es la Prueba de Microaglutinación (MAT). Sin embar-
go, las bajas concentraciones de anticuerpos en infecciones
crónicas inducidas por cepas adaptadas a bovinos pueden
limitar la interpretación de los resultados correctos. El cultivo
bacteriológico de Leptospira spp. es la prueba estándar de oro
porque puede demostrar la presencia del agente. Por lo tanto,
esta investigación tuvo como objetivo revelar la presencia de
Leptospira spp. en fetos abortados, secreciones genito-urina-
rias de Bubalus bubalis hembra y macho, materias primas ali-
mentarias y heces de roedores mediante cultivo bacteriológico.
Los análisis se realizaron en una nca ubicada en el estado
Cojedes, Venezuela. Esta nca tiene una tasa de aborto del
17,05% y una mortalidad al nacer del 2,98%. Para ello se ex-
trajeron 18 muestras de sangre (16 hembras y dos machos)
mediante punción de la vena yugular, que se dejaron coagu-
lar para obtener el suero, así como muestras de orina de 2
búfalas hembra, un búfalo macho y semen recogido de otros
2 animales. Además, se recolectaron dos fetos de 120 y 75
días de gestación. Tras la necropsia se obtuvieron muestras
The use of bacterial culture for Leptospirosis di-
agnosis in female water bu󰀨aloes
Rosaura Pérez-Gil 1*, Oriana Gavidia1, Juan Torres2
1Centro Diagnóstico Veterinario Rosaura Pérez-Gil, Araure,
Venezuela.
2Clínica Bovina, Venezuela.
*Corresponding author: Pérez-Gil, Rosaura (rperezgil@gmail.com).
ABSTRACT
The test most used for leptospirosis diagnosis is the Mi-
croagglutination Test (MAT). However, the low antibody titers
in chronic infections induced by strains adapted to bovines
can limit the interpretation of the correct results. The bacterio-
logical culture of Leptospira spp. is the gold standard test be-
cause it can demonstrate the agent’s presence. Therefore, this
research aimed to reveal the presence of Leptospira spp. in
aborted fetuses, genital-urinary secretions of female and male
Bubalus bubalis, food raw materials, and rodent feces using
bacteriological culture. The analyses were performed on a farm
located in the state of Cojedes, Venezuela. This farm has an
abortion rate of 17,05% and 2,98% mortality at birth. For this,
18 blood samples (16 females and two males) were extracted
by puncture of the jugular vein, and these were allowed to co-
agulate to obtain the serum and urine samples from 2 female
bu󰀨aloes, one male bu󰀨alo, and semen from 2 other animals,
were collected. Additionally, two fetuses of 120 and 75 days of
gestation were collected. Also, after the necropsy, uid samples
were obtained from the abdomen, umbilical artery, ocular and
thoracic cavities, and amniotic liquid, and two samples of liver,
AHOH-172 Rev. Cientif. FCV-LUZ, XXXIII, SE, 223-224, 2023, https://doi.org/10.52973/rcfcv-wbc083
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13th World Bu󰀨alo Congress ~ 13er Congreso Mundial de Búfalos / Posters / Animal Health & One Health ___________________________
spleen, kidney, lung, heart, and brain were collected. Further-
more, samples of food ration and of the four by-products (corn
silage, hay, urea, mineral) that compose it were collected, be-
sides the rodent feces found in the storage where the food was
preserved. The standard serological MAT was performed with a
panel of strains of 7 Leptospira serovars. The uids and tissue
samples were inoculated in Ellinghausen–McCullough–John-
son–Harris medium (EMJH), a liquid culture medium selective
for Leptospira. A portion of the tissue sample was xed in 10%
bu󰀨ered formalin for histological slices and routine H-E stain-
ing. The MAT results indicated titers of 1:50 for the Icterohaem-
morragiae serovar at 5.5%, Pomona at 5.5%, and Bratislava at
5.5%. The serovars Canicola, Grippotyphosa, Harjo bovis, and
Harjo pratjino were negative. There was a growth of Leptospira
spp. in fetal uids from the abdomen, umbilicus, thorax, liver,
spleen, lung, kidney, and heart tissues; in the same way, Lepto-
spira spp. growth was obtained after the culture of urine and se-
men samples, food, corn silage, hay, urea-mineral and rodent
feces. Histopathology analysis showed lesions in the spleen as
extra-medullary hematopoiesis and hemorrhage; in the kidney
(multifocal hemorrhages, tubular degeneration, and edema)
while in the lungs, perivascular hemorrhages and degeneration
of the vascular wall were observed. In conclusion, these pre-
liminary results suggest that the MAT cannot diagnose all Lep-
tospirosis cases correctly, especially chronic infections charac-
terized by low antibodies. At the same time, the culture in EMJH
seems to solve this weakness, as Leptospira spp. growth was
obtained from di󰀨erent biological samples. Additionally, these
preliminary ndings conrm Leptospira is an agent involved in
abortions, as we obtained Leptospira spp. growth from aborted
fetus samples. Finally, it is likely that this bacterium growing in
the bacteriological cultures belongs to a serovar di󰀨erent from
those in the panel of strains used in MAT, so the cultures were
preserved for subsequent studies that contemplate molecular
identication.
Keywords: Leptospira, antibodies, MAT, bu󰀨aloes.
de uidos del abdomen, arteria umbilical, cavidades ocular y
torácica y líquido amniótico, y se recogieron dos muestras de
hígado, bazo, riñón, pulmón, corazón y cerebro. Además, se
recolectaron muestras de la ración alimenticia y de los cuatro
subproductos (ensilaje de maíz, heno, urea, mineral) que la
componen, además de heces de roedores encontradas en el
depósito donde se conservaba el alimento. El MAT serológico
estándar se realizó con un panel de cepas de 7 serovares de
Leptospira. Los uidos y muestras de tejido se inocularon en
medio Ellinghausen-McCullough-Johnson-Harris (EMJH), un
medio de cultivo líquido selectivo para Leptospira. Una porción
de la muestra de tejido se jó en formalina tamponada al 10%
para cortes histológicos y tinción HE de rutina. Los resultados
de MAT indicaron concentraciones de 1:50 para el serovar Ic-
terohaemmorragiae al 5,5%, Pomona al 5,5% y Bratislava al
5,5%. Los serovares Canicola, Grippotyphosa, Harjo bovis y
Harjo pratjino resultaron negativos. Hubo un crecimiento de
Leptospira spp. en uidos fetales del abdomen, ombligo, tórax,
hígado, bazo, pulmón, riñón y tejidos del corazón; de la misma
manera, se obtuvo el crecimiento de Leptospira spp. luego del
cultivo de muestras de orina y semen, alimentos, ensilaje de
maíz, heno, urea-mineral y en heces de roedores. El análisis
histopatológico mostró lesiones en el bazo como hematopo-
yesis extramedular y hemorragia; en el riñón (hemorragias
multifocales, degeneración tubular y edema); mientras que en
el pulmón, se observaron hemorragias perivasculares y dege-
neración de la pared vascular. En conclusión, estos resultados
preliminares sugieren que el MAT no puede diagnosticar co-
rrectamente todos los casos de Leptospirosis, especialmente
las infecciones crónicas caracterizadas por niveles bajos de
anticuerpos. Al mismo tiempo, el cultivo en EMJH parece solu-
cionar esta debilidad, ya que el crecimiento de Leptospira spp.
se obtuvo de diferentes muestras biológicas. Además, estos
hallazgos preliminares conrman que Leptospira es un agen-
te involucrado en abortos, ya que obtuvimos Leptospira spp.
crecimiento de muestras de fetos abortados. Finalmente, es
probable que esta bacteria que crece en los cultivos bacterio-
lógicos pertenezca a un serovar diferente a los del panel de
cepas utilizadas en MAT, por lo que los cultivos se conservan
para estudios posteriores que contemplen la identicación mo-
lecular.
Palabras clave: Leptospira, anticuerpos, MAT, búfalos.