301
Rev. Fac. Agron. (LUZ). 2021, 38: 301-321. Abril-Junio.
DOI: https://doi.org/10.47280//RevFacAgron(LUZ).v38.n2.05 ISSN 2477-9407
Esta publicación cientíca en formato digital es continuación de la Revista Impresa: Depósito legal pp 196802ZU42, ISSN 0378-7818.
Recibido el 22-06-2020 . Aceptado el 08-09-2020.
*Autor de correspondencia. Correo electrónico: elorenablancoc@gmail.com
Selección de un consorcio microbiano promotor del
crecimiento de plántulas de cebolla en condiciones
de umbráculo
Selection of a growth promoter microbial consortium in
onion seedlings under shade-house conditions
Seleção de um consórcio microbiano promotor de
crescimento de mudas de cebola em casa de vegetação
Erika Lorena Blanco
1,2,3*
, Fermín Rada
2
, Yulimar Castro
3,4
y
Jorge Paolini
5
1
Laboratorio de Biotecnología y Química de Polímeros (LIBQPOL). Decanato de
Investigación. Universidad Nacional Experimental del Táchira (UNET). Apdo. 5001. San
Cristóbal, Venezuela. Correo electrónico: elorenablancoc@gmail.com. .
2
Instituto de
Ciencias Ambientales y Ecológicas (ICAE). Postgrado en Ecología Tropical. Facultad de
Ciencias. Universidad de Los Andes. Apdo. 5101. Mérida, Venezuela. Correo electrónico:
fradarincon@gmail.com. .
3
Laboratorio de Fitobiotecnología. Departamento de
Biología. Facultad de Ciencias. Universidad de Los Andes (ULA). Apdo. 5101. Mérida,
Venezuela. Correo electrónico: yulimarcastromolina@gmail.com. .
4
Laboratório de
Fermentações, Programa Pós Graduação em Microbiología Agrícola, Universidad Federal
de Lavras, Apdo. 3037, Minas Gerais, Brasil.
5
Centro
de Ecología. Instituto Venezolano
de Investigaciones Cientícas (IVIC). Apdo. 21825. 1020-A Caracas, Venezuela. Correo
electrónico: mapire3000@gmail.com . .
Resumen
La práctica de producir plántulas más vigorosas representa una ventaja
competitiva al momento del trasplante de un cultivo, y el uso de biofertilizantes
combinados son una alternativa ecológica sustentable. El objetivo de esta
investigación fue seleccionar un consorcio microbiano para la producción de
cebolla híbrido F1 2000 en semilleros bajo condiciones de umbráculo. Para ello
se utilizaron cinco cepas rizobacterianas de los géneros Rhizobium (cepa ME01),
Bradyrhizobium (cepas Leu2A y YE1), Ochrobactrum (cepa ES1) y Pseudomonas
(cepa Alf), que han mostrado efectos benécos sobre plántulas de pimentón
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y
lechuga. Estas rizobacterias se inocularon de forma mixta (consorcio
microbiano) en cebolla así: Alf+ES1, ME01+ES1, ES1+Leu2A, Alf+Leu2A,
YE1+ES1, ME01+Alf, YE1+Alf, ME01+YE1, YE1+Leu2A, ME01+Leu2A,
utilizando un suelo proveniente de San Juan de Lagunillas-Mérida, Venezuela
en condiciones de umbráculo durante 60 días. Se determinaron las variables:
número de hojas, diámetro de la base del pseudotallo, longitud aérea y de
la raíz, peso fresco y seco aéreo y de la raíz. Adicionalmente, a las plántulas
del consorcio seleccionado, se les realizó una curva de asimilación de CO
2
con
diferentes niveles de luz para observar su respuesta fotosintética. El consorcio
ME01 + Leu2A (Rhizobium tropici + Bradyrhizobium japonicum) fue el que
incrementó todas las variables determinadas, especialmente el diámetro de
la base del pseudotallo, determinante para el cultivo de cebolla, y produjo
una mayor tasa de asimilación de CO
2
en las plántulas. Se propone el uso
de este consorcio microbiano como una opción para la producción agrícola en
condiciones de semillero.
Palabras clave: Allium cepa L., biofertilizantes, rizobios, tasa de asimilación de
CO
2
.
Abstract
The practice of producing more vigorous seedlings represents a competitive
advantage at the time of transplanting a crop, and the use of combined
biofertilizers are a sustainable ecological alternative. The objective of this
research was to select a microbial consortium for the production of F1 2000
hybrid onion seedbeds under shade-house conditions. Five rhizobacterial
strains of the genera Rhizobium (ME01 strain), Bradyrhizobium (Leu2A
and YE1 strains), Ochrobactrum (ES1 strain) and Pseudomonas (Alf strain),
which have shown favorable effects on pepper and lettuce seedlings. These
rhizobacteria were inoculated in a mixed manner (microbial consortium) in
onion as follows: Alf+ES1, ME01+ES1, ES1+Leu2A, Alf+Leu2A, YE1+ES1,
ME01+Alf, YE1+Alf, ME01+YE1, YE1+Leu2A, ME01+Leu2A, using a soil
from San Juan de Lagunillas-Mérida, Venezuela under shade-house conditions
for 60 days. The following variables were determined: number of leaves,
pseudostem base diameter, aerial and root length, aerial and root fresh and
dry weight. Additionally, a CO
2
assimilation curve under different light levels
was carried out on the seedlings of the selected consortium to observe their
photosynthetic response. The consortium ME01 + Leu2A (Rhizobium tropici
+ Bradyrhizobium japonicum) increased all studied variables, especially the
pseudostem base diameter, essential for onion cultivation, and yielded higher
seedlings CO
2
assimilation rates. The use of this microbial consortium is
recommended as an option for agricultural production under seedbed conditions.
Key words: Allium cepa L., biofertilizers, rhizobia, CO
2
assimilation rate.
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Resumo
A prática de produzir mudas mais vigorosas representa uma vantagem
competitiva no momento do transplante de uma cultura e, o uso de biofertilizantes
combinados é uma alternativa ecológica sustentável. O objetivo desta pesquisa
foi selecionar um consórcio microbiano para a produção de mudas de cebola
híbridos F1 2000 em canteiros sob condições de casa de vegetação. Para isto,
foram utilizadas cinco cepas rizobacterianos dos gêneros Rhizobium (cepa ME01),
Bradyrhizobium (cepas Leu2A e YE1), Ochrobactrum (cepa ES1) e Pseudomonas
(cepa Alf), que tem mostrado efeitos benécos nas mudas de pimentão e alface.
Essas rizobacterias foram inoculadas de forma misturada (consórcio microbiano)
em cebola da seguinte forma: Alf+ES1, ME01+ES1, ES1+Leu2A, Alf+Leu2A,
YE1+ES1, ME01+Alf, YE1+Alf, ME01+YE1, YE1+Leu2A, ME01+Leu2A,
utilizando solo de San Juan de Lagunillas-Mérida, Venezuela em condições de
casa de vegetação por 60 dias. Foram determinadas as variáveis: número de folhas,
diâmetro da base do pseudocaule, comprimento do caule e da raiz, peso fresco e
peso seco do caule e da raiz. Além disso, nas mudas de consórcio selecionado foi
realizada uma curva de assimilação de CO
2
com diferentes níveis de luz para
observar sua resposta fotossintética. O consórcio ME01 + Leu2A (Rhizobium
tropici + Bradyrhizobium japonicum) foi quem aumentou todas as variáveis
determinadas, especialmente o diâmetro da base do pseudocaule, determinante
para o cultivo da cebola, e produziu uma maior taxa de assimilação de CO
2
nas
mudas. É proposta a utilização deste consórcio microbiano como uma opção para
a produção agrícola em condições de canteiro.
Palavras-chave: Allium cepa L., biofertilizantes, rizobios, taxa de assimilação
de CO
2
.
Introducción
Los vegetales requieren un cuidado
especial durante su crecimiento inicial,
bien sea para formar plántulas más
vigorosas y tener más éxito durante
el trasplante o para estar protegidas
contra agentes topatógenos. Estos
efectos benécos sobre el crecimiento
vegetal pueden ser producidos por
la aplicación de microorganismos
promotores del crecimiento vegetal
(MPCV) que han mostrado ventajas
sobre la germinación y el desarrollo
de distintos semilleros (tomate, ají,
Introduction
Vegetables require special care
during their initial growth, either
to form more vigorous seedlings
and be more successful during
transplantation or to be protected
against phytopathogens. These
benecial effects on plant growth can
be produced by the application of plant
growth promoting microorganisms
(PGPM) that have shown advantages
over germination and development
of different seedbeds (tomato, chili
pepper, lettuce, paprika) either
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lechuga, pimentón) bien sea de forma
individual o en consorcio, gracias a
sus variados mecanismos de acción
biológica (Jayashree y Jagadeesh,
2017; Blanco et al., 2018; Alcedo y
Reyes, 2018).
Un consorcio microbiano desde el
punto de vista de la co-inoculación
es una asociación de dos o más
poblaciones microbianas, de diferentes
géneros y especies, que interaccionan
sinérgicamente como una comunidad
en un sistema complejo, donde todos
se benecian de las actividades de
los demás, mediante estilos de vida
sinérgicos en los que el crecimiento y
el ujo cíclico de nutrientes se conduce
más efectiva y ecientemente que en
poblaciones individuales (Olmedo,
2003; Ochoa-Carreño y Montoya-
Restrepo, 2010; Gangaraddi y
Brahmaprakash, 2018). Los consorcios
microbianos pueden resistir mejor los
periodos de limitación de nutrientes
debido a la diversidad metabólica
disponible por la diversidad de
especies, combinada con la habilidad
de compartir metabolitos dentro
de la comunidad. Una condición
de limitación de nutrientes puede
favorecer a una población minoritaria
si esta tiene la habilidad metabólica
capaz de sostener la supervivencia
de todo el consorcio, o ante variadas
condiciones de fertilidad del suelo,
puede incentivarse la acción de un
grupo funcional microbiano (Reyes y
Valery, 2007). Esto también dependerá
del éxito del quorum sensing (también
llamado autoinducción), el cual se
conoce como un mecanismo bacteriano
de comunicación célula-célula en
respuesta al tamaño de la población
individually or in consortium, because
of its various mechanisms of biological
action (Jayashree and Jagadeesh,
2017; Blanco et al., 2018; Alcedo and
Reyes, 2018).
From the point of view of co-
inoculation, a microbial consortium is
an association of two or more microbial
populations, of different genera and
species, that interact synergistically
as a community in a complex system,
where all benet from the activities
of the others, through synergistic
lifestyles in which growth and the
cyclical ow of nutrients are conducted
more effectively and efciently than
in individual populations (Olmedo,
2003; Ochoa-Carreño and Montoya-
Restrepo, 2010; Gangaraddi and
Brahmaprakash, 2018). Microbial
consortia can better withstand
periods of nutrient limitation due to
the metabolic diversity available from
species diversity, combined with the
ability to share metabolites within the
community. A condition of nutrient
limitation can favor a minority
population if it has the metabolic ability
capable of sustaining the survival of
the entire consortium, or in the face
of various soil fertility conditions,
the action of a microbial functional
group can be encouraged (Reyes and
Valery, 2007). This will also depend
on the success of quorum sensing (also
called autoinduction), which is known
as a bacterial mechanism of cell-cell
communication in response to the size
of the bacterial population to regulate
gene expression in order to produce
some extracellular polysaccharides,
enzymes degradative, antibiotics,
siderophores, biolm formation, which
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bacteriana para regular la expresión
genética con el objetivo de producir
algunos polisacáridos extracelulares,
enzimas degradativas, antibióticos,
sideróforos, formación de biopelículas,
lo que muestra la importancia del
quorum sensing en comunidades
bacterianas asociadas a plantas
(Antoun y Prévost, 2005; Brom et al.,
2014; Yashaswini y Vijay Kumar,
2016).
Estudios recientes promueven
el uso de consorcios con bacterias de
distintos géneros como Klebsiella,
Pseudomonas, Rhizobium, Bacillus,
Sphingomonas, Enterobacter,
Agrobacterium, Paenibacillus, para
la promoción del crecimiento de
trigo (Wang et al., 2020), y el uso de
consorcios formados por Rhizobium,
Enterobacter clocae y Pseudomonas
sp. para la promoción del crecimiento
de haba bajo condiciones de estrés
oxidativo (Fatnassi et al., 2015).
Actualmente la cebolla es un cultivo
de alto valor económico en Venezuela
debido a la carencia de semillas
certicadas, y a los altos costos de
fertilizantes químicos y plaguicidas.
Su cultivo se realiza normalmente
en suelos de textura media (franco
arenosos), con buen drenaje y ricos
en materia orgánica para favorecer
el desarrollo de las raíces y de los
bulbos (Enciso et al., 2019). En el
estado Mérida este cultivo posee una
supercie cosechada de 491,39 ha para
este rubro, lo cual ubica a la región
andina como una localidad importante
para la siembra de cebolla en el país,
con zonas semiáridas que propician
las condiciones climáticas favorables
para su cultivo (MPPAT, 2017).
shows the importance of quorum
sensing in bacterial communities
associated with plants (Antoun and
Prévost, 2005; Brom et al., 2014;
Yashaswini and Vijay Kumar, 2016).
Recent studies promote the
use of consortia with bacteria of
different genera such as Klebsiella,
Pseudomonas, Rhizobium, Bacillus,
Sphingomonas, Enterobacter,
Agrobacterium, Paenibacillus, for the
promotion of wheat growth (Wang et
al., 2020), and the use of consortia
formed by Rhizobium, Enterobacter
clocae and Pseudomonas sp. for the
promotion of broad bean growth
under conditions of oxidative stress
(Fatnassi et al., 2015).
Currently, onion is a crop of high
economic value in Venezuela due to
the lack of certied seeds, and the
high costs of chemical fertilizers and
pesticides. Its cultivation is normally
carried out in soils of medium texture
(sandy loam), with good drainage
and rich in organic matter to favor
the development of roots and bulbs
(Enciso et al., 2019). In the state of
Mérida, this crop has a harvested area
of 491.39 ha for this item, which places
the andean region as an important
location for the planting of onions in
the country, with semi-arid areas that
favor favorable climatic conditions for
its cultivation (MPPAT, 2017).
The objective of this research was
to select an autochthonous microbial
consortium from the state of Mérida
that promotes plant growth, for the
growth of onion seedlings under shade
conditions, using soil from a semi-arid
area, increasing regional and national
production, as well as reducing
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El objetivo de esta investigación fue
seleccionar un consorcio microbiano
autóctono del estado Mérida promotor
del crecimiento vegetal, para el
crecimiento de plántulas de cebolla en
condiciones de umbráculo, utilizando
un suelo proveniente de una zona
semiárida, con miras a incrementar
la producción regional y nacional,
así como disminuir las dosis de
fertilizantes químicos en campo.
Materiales y métodos
Material biológico
Se utilizaron cinco cepas
rizobacterianas autóctonas del estado
Mérida, pertenecientes al Laboratorio
de Fitobiotecnología-ULA, que de
forma individual mostraron potencial
biofertilizante sobre plántulas de
pimentón y lechuga (Blanco et al.,
2018). Las cepas usadas fueron
ME01 (Rhizobium tropici) (Marquina
et al., 2011), Leu2A (Bradyrhizobium
japonicum), YE1 (Bradyrhizobium
spp.), ES1 (Ochrobactrum spp.) y Alf
(Pseudomonas uorescens) (Blanco
et al., 2018), caracterizadas como
productoras de ácido indol acético,
sideróforos, ácido cianhídrico,
disolventes de fósforo, y antagónicas
contra los topatógenos Fusarium
oxysporum y Colletotrichum
gloeosporioides (Blanco y Castro,
resultados no publicados).
Además, se utilizó semilla de
cebolla certicada híbrido F1 2000
(casa comercial Hazera), una cebolla
amarilla de día corto que ha mostrado
cierta tolerancia al bajo contenido de
humedad en el suelo (Estrada-Prado
et al., 2015).
the doses of chemical fertilizers in
the eld.
Materials and methods
Biological material
Five autochthonous rhizobacterial
strains from the Mérida state, belonging
to Laboratorio de Fitobiotecnología-
ULA, which individually showed
biofertilizing potential on paprika and
lettuce seedlings were used (Blanco
et al., 2018). The strains used were
ME01 (Rhizobium tropici) (Marquina
et al., 2011), Leu2A (Bradyrhizobium
japonicum), YE1 (Bradyrhizobium
spp.), ES1 (Ochrobactrum spp.) and Alf
(Pseudomonas uorescens) (Blanco et
al., 2018 ), characterized as producers
of indole acetic acid, siderophores,
hydrocyanic acid, phosphate
solubilizers, and antagonists against
the phytopathogens Fusarium
oxysporum and Colletotrichum
gloeosporioides (Blanco and Castro,
unpublished results).
In addition, F1 2000 hybrid certied
onion seed (Hazera commercial house)
was used, a short-day yellow onion
that has shown a certain tolerance
to low moisture content in the soil
(Estrada-Prado et al., 2015).
Soil
Soil from the Estación
Experimental del Instituto de
Investigaciones Agropecuarias (IIAP),
from Facultad de Ciencias Forestales
y Ambientales, ULA, located in San
Juan de Lagunillas-Mérida, Sucre
municipality, Mérida state, was
used as it is a semi-arid area with
favorable soil for growing onion. The
altitude of the site is between 1050
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Blanco et al. ISSN 2477-9407
Suelo
Se usó un suelo proveniente
de la Estación Experimental
del Instituto de Investigaciones
Agropecuarias (IIAP) de la
Facultad de Ciencias Forestales y
Ambientales de la ULA, ubicada
en San Juan de Lagunillas-Mérida,
municipio Sucre, estado Mérida,
por tratarse de una zona semiárida
con suelo favorable para el cultivo
de cebolla. La altitud del lugar
se encuentra entre 1050 a 1100
msnm, y su ubicación geográca
corresponde a los 8° 31’ N y 71° 22’
W. Se tomó una muestra compuesta
del suelo y se tamizó a través de
una malla de 2,36 mm de diámetro
para preparar el semillero. Las
características físico-químicas del
suelo se muestran en el Cuadro 1.
Cuadro 1. Características físico químicas del suelo proveniente de
la parcela experimental del Instituto de Investigaciones
Agropecuarias (IIAP) de la Facultad de Ciencias Forestales
y Ambientales de la ULA, en San Juan de Lagunillas, estado
Mérida.
Table 1. Physical-chemical characteristics of the soil from the
experimental plot of the Instituto de Investigaciones
Agropecuarias (IIAP) of the Facultad de Ciencias Forestales y
Ambientales of the ULA, in San Juan de Lagunillas, Merida state.
Textura
a
MO
b
%
Pdisp
c
mg.kg
-1
pH
(1:2,5)
C.E
(1:5)
mS.cm
-1
K
d
mg.kg
-1
Ca
d
mg.kg
-1
Mg
d
mg.kg
-1
Rel Ca/Mg
Franco
arenosa
3,61 30 6,04 0,14 568 2060 1872 0,66
a
Bouyoucos;
b
Materia orgánica por Walkley y Black;
c
Fósforo disponible por Bray I (0,03 M NH
4
F
+ 0,025 M HCl);
d
Cationes intercambiables por extracción con acetato de amonio 1 M pH 7,0.
a
Bouyoucos;
b
Organic matter by Walkley and Black; Bray I available phosphorus (0.03 M NH
4
F +
0.025 M HCl); Exchangeable cations by extraction with 1 M ammonium acetate pH 7.0.
to 1100 masl, and its geographical
location corresponds to 8° 31’ N and
71° 22' W. A composite sample of the
soil was taken and sieved through a
2.36 mm in diameter mesh to prepare
the seedbed. The physical-chemical
characteristics of the soil are shown in
Table 1.
Preparation of the inoculums
The rhizobia strains grew in
agarized medium yeast extract-
mannitol YMAmodied with0.5 g.L
-1
K
2
HPO
4
, 0.2 g.L
-1
MgSO
4
.7H
2
O, 0.1
g.L
-1
NaCl, 0.5 g.L
-1
yeast extract, 2.5
g.L
-1
mannitol, 7.5 g.L
-1
sucrose, 2.5
mg.mL
-1
Congo red pH 6.7-6.8 (Vincent,
1975) at 29 °C. The incubation period
of the rhizobia was carried out
according to the growth dynamics
of each strain, until its exponential-
stationary phase (24-36 h) using the
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Preparación de los inóculos
Las cepas rizobianas crecieron en
medio agarizado extracto de levadura-
manitol YMA modicado con 0,5
g.L
-1
K
2
HPO
4
, 0,2 g.L
-1
MgSO
4
.7H
2
O,
0,1 g.L
-1
NaCl, 0,5 g.L
-1
extracto de
levadura, 2,5 g.L
-1
manitol, 7,5 g.L
-1
sacarosa, 2,5 mg.mL
-1
rojo congo
pH 6,7-6,8 (Vincent, 1975) a 29
°C. El período de incubación de los
rizobios se realizó según la dinámica
de crecimiento de cada cepa, hasta
su fase exponencial-estacionaria
(24-36 h) utilizando como modelo la
curva de crecimiento para rizobios
determinada por Blanco et al. (2013)
en este medio de crecimiento. Los
inóculos se prepararon de forma mixta
con el cultivo de cada cepa mediante
el conteo celular con una cámara de
Neubauer a una concentración 1x10
8
cel.mL
-1
de cada cepa en solución
salina 0,89 % NaCl. Se preparó un
control solo con solución salina 0,89 %
NaCl y sin consorcios. Seguidamente
los inóculos se mantuvieron durante
20 minutos a 90 rpm en una
agitadora a temperatura ambiente
con la nalidad de homogenizar la
suspensión celular. Los tratamientos
utilizados correspondieron a los
consorcios preparados (proporción
1:1), según el Cuadro 2.
Ensayo en umbráculo
Las semillas de cebolla se
desinfectaron mediante lavado con
solución jabonosa al 1 % (jabón en
barra) durante 10 min, seguido de
5 enjuagues con agua destilada
estéril, luego lavado con cloro al
1 % por 1 min, y por último, 10
enjuagues con agua destilada estéril,
según protocolo estandarizado en el
growth curve for rhizobia determined
by Blanco et al. (2013) as a model in
this growth medium. The inocula were
prepared in a mixed manner with the
culture of each strain by means of cell
counting with a Neubauer chamber
at a concentration of 1x10
8
cel.mL
-1
of each strain in 0.89 % NaCl saline
solution. A control was prepared only
with saline 0.89 % NaCl and without
consortia. The inocula were then
kept for 20 minutes at 90 rpm in a
shaker at room temperature in order
to homogenize the cell suspension.
The treatments used corresponded
to the prepared consortia (1:1 ratio),
according to Table 2.
Shade-house experiment
The onion seeds were disinfected
by washing with 1 % soap solution
(bar soap) for 10 min, followed by 5
rinses with sterile distilled water,
then washing with 1 % chlorine for
1 min, and nally, 10 rinses with
sterile distilled water, according
to standardized protocol in the
Laboratorio de Fitobiotecnología.
The disinfected seeds were added to
the inocula of each consortium and
placed under shaking at 90 rpm for
1 h. Horticultural trays of 50 cells
lled with the soil of experimental
station (approximately 50 g of soil per
cell) were used, two seeds were sown
per cell (40 seeds per treatment),
they were moistened and covered
with commercial sterile substrate
to facilitate cotyledon emergence.
The trays were kept under shade
conditions (temperature 27.4 °C,
relative humidity 65 %, light 137
μmol.m
-
2
.s
-1
). Twenty days after
cotyledon emergence, thinning was
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Laboratorio de Fitobiotecnología. Las
semillas desinfectadas se agregaron
a los inóculos de cada consorcio y
se colocaron en agitación a 90 rpm
por 1 h. Se utilizaron bandejas de
horticultura de 50 celdas sustentadas
con el suelo de la parcela experimental
a utilizar (aproximadamente 50 g de
suelo por celda), se sembraron dos
semillas por celda (40 semillas por
tratamiento), se humedecieron y se
cubrieron con sustrato comercial
estéril para facilitar la emergencia
cotiledonar. Las bandejas se
mantuvieron en condiciones de
umbráculo (temperatura 27,4 °C,
humedad relativa 65 %, luz 137
μmol.m
-2
.s
-1
). A los 20 días de la
emergencia cotiledonar se realizó un
raleo dejando así una sola plántula por
celda. Las plántulas se reinocularon
inmediatamente cada una con 1
mL de inóculo 1x10
8
cel.mL
-1
del
tratamiento correspondiente. El riego
se realizó a capacidad de campo con
frecuencia interdiaria o diaria según
las condiciones ambientales. El riego
nutricional se realizó con solución
Hoagland (Taiz y Zeiger, 2010) dos
veces por semana a capacidad de
campo, fraccionando la concentración
de sus nutrientes 12,5 % días 15-20, 20
% todos sus nutrientes (Ca y K 100 %)
días 20-25, 25 % todos sus nutrientes
(Ca y K 125 %) días 25-45, y 50 % todos
los nutrientes (Ca y K 100 %) días 45-
60 después de la siembra en bandejas.
Esta dosicación nutricional se realizó
con base en Blanco et al. (2018), y a
sugerencias de productores agrícolas
de cebolla con respecto al Ca y al K en
fase de semillero, por la importancia
de los mismos para la formación de
performed, thus leaving a single
seedling per cell. The seedlings were
immediately re-inoculated each with 1
mL of inoculum 1x10
8
cell.mL
-1
of the
corresponding treatment. Irrigation
was carried out at eld capacity with
interday or daily frequency depending
on the environmental conditions. The
nutritional irrigation was carried out
with Hoagland solution (Taiz and
Zeiger, 2010) twice a week at eld
capacity, dividing the concentration
of its nutrients 12.5 % days 15-20, 20
% all its nutrients (Ca and K 100 % )
days 20-25, 25 % all its nutrients (Ca
and K 125 %) days 25-45, and 50 %
all nutrients (Ca and K 100 %) days
45-60 after planting in trays. This
nutritional dosage was used based on
Blanco et al. (2018), and suggestions
from local onion producers regarding
Ca and K in the seedling phase, due
to their importance for the formation
of seedlings and because there is no
evidence so far that these elements
are facilitated due to the presence of
the consortia employed (Enciso et al.,
2019).
The treatments were evaluated
with 15 repetitions each. The trial
was disassembled at 60 days and the
following morphometric variables
were determined: stem and root length,
fresh and dry weight of stem and root,
number of leaves, and the diameter of
the pseudostem base, in order to study
the effect of consortia on the growth of
the onion in the seedling phase under
controlled conditions. Additionally, for
the of the control treatment and of the
one selected as the most promising
consortium (n = 5), a light saturation
curve was performed to determine
310
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las plántulas y debido a que no hay
evidencias hasta ahora de que estos
elementos sean facilitados por la
presencia de los consorcios empleados
(Enciso et al., 2019).
Los tratamientos se evaluaron
con 15 repeticiones cada uno. El
ensayo se desmontó a los 60 días y se
determinaron las siguientes variables
morfométricas: longitud de tallo y
raíz, peso fresco y seco de tallo y
raíz, número de hojas, y el diámetro
de la base del pseudotallo para
estudiar el efecto de los consorcios
sobre el crecimiento de la cebolla en
fase de semillero bajo condiciones
controladas. Adicionalmente, a las
plántulas del tratamiento control y
del seleccionado como el consorcio
más promisorio (n=5), se les realizó
una curva de saturación de luz para
determinar su actividad fotosintética,
utilizando un sistema portátil de
intercambio de gases (LC-Pro, ADC
Bioscientic Ltd.), programando
Cuadro 2. Tratamientos utilizados en el experimento (preparados en
solución salina 0,89 % NaCl).
Table 2. Treatments used in the experiment (prepared in saline solution
0.89 % NaCl).
Tratamientos biológicos Descripción
Control (sin inocular)
Alf+ES1
ME01+ES1
ES1+Leu2A
Alf+Leu2A
YE1+ES1
ME01+Alf
YE1+Alf
ME01+YE1
YE1+Leu2A
ME01+Leu2A
Sin consorcios
Pseudomonas uorescens + Ochrobactrum spp.
Rhizobium tropici + Ochrobactrum spp.
Ochrobactrum spp. + Bradyrhizobium japonicum
Pseudomonas uorescens + Bradyrhizobium japonicum
Bradyrhizobium spp. + Ochrobactrum spp.
Rhizobium tropici + Pseudomonas uorescens
Bradyrhizobium spp. + Pseudomonas uorescens
Rhizobium tropici + Bradyrhizobium spp.
Bradyrhizobium spp. + Bradyrhizobium japonicum
Rhizobium tropici + Bradyrhizobium japonicum
their photosynthetic activity, using a
portable gas exchange system (LC-Pro,
ADC Bioscientic Ltd.), programming
measurements between 0 and 1800
μmol.m
-2
.s
-1
through an articial light
source and the respective equipment
software; the data were processed
with the Sigmaplot software. From
this curve the maximum assimilation
rate at light saturation was obtained.
Statistic analysis
The data were analyzed using a one-
way ANOVA and the LSD test (p<0.05)
with the Statgraphics software
(Statistical Graphics Corporation,
2002). The assumption of normality
and the homogeneity of variance
were checked with the Bartlett test.
However, the results of the variables
of dry weight, fresh root weight, and
diameter of the pseudostem base,
were subjected to the Kruskall Wallis
test with the statistical software
Infostat (InfoStat Statistical Software,
2002), because the data they did not
311
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mediciones entre 0 y 1800 μmol.m
-2
.s
-1
a través de una fuente de luz articial
y el respectivo software del equipo; los
datos se procesaron con el programa
Sigmaplot. De dicha curva se obtuvo
la tasa de asimilación máxima a
saturación de luz.
Análisis estadístico
Los datos se analizaron mediante
un ANOVA de una vía y la prueba LSD
(p<0,05) con el programa Statgraphics
(Statistical Graphics Corporation,
2002). Se comprobó el supuesto de
normalidad y la homogeneidad de
varianza con el test de Bartlett.
Sin embargo, los resultados de las
variables de peso seco, peso fresco raíz,
y diámetro de la base del pseudotallo,
se sometieron a la prueba de Kruskall
Wallis con el programa estadístico
Infostat (InfoStat Statistical
Software, 2002), debido a que los
datos no cumplieron con los supuestos
de normalidad y homogeneidad de las
varianzas (Montgomery, 1991).
Resultados y discusión
Efecto de los consorcios sobre
el crecimiento de las plántulas de
cebolla
En el cuadro 3 se pueden observar
los efectos de la compatibilidad
consorcios-cultivo. En este sentido,
los consorcios promisorios para las
variables de crecimiento determinadas
fueron ME01+YE1, YE1+Leu2A,
y ME01+Leu2A, debido a que
incrementaron signicativamente
(p<0,05) las variables: número de
hojas, longitud (total, raíz y aérea),
pesos fresco y seco (raíz y aéreo),
así como el diámetro de la base del
meet the assumptions of normality
and homogeneity of the variances
(Montgomery, 1991).
Results and discussion
Effect of consortia on the
growth of onion seedlings
Table 3 shows the effects of
the compatibility among microbial
consortia and crop. In this sense, the
promising consortia for the growth
variables determined were ME01
+ YE1, YE1 + Leu2A, and ME01 +
Leu2A, due to the signicant increase
(p<0.05) of the variables: number
of leaves, length (total, root and
aerial), fresh and dry weights (root
and aerial), as well as the diameter
of the pseudostem base, above the
other consortia tested and the control
(without inoculating). On the other
hand, the Alf + ES1, ME01 + Alf,
and YE1 + Alf consortia did not exert
any effect on the seedlings, since the
values in the determined variables did
not show signicant differences with
respect to the non-inoculated control.
Of these consortia, the ME01
+ Leu2A stood out, consisting of
a Rhizobium tropici strain and a
Bradyrhizobium japonicum strain
respectively, for its positive effect
on the increase of all the variables
determined, especially the diameter
of the base of the pseudostem or
neck (increase in up to 300 %), which
corresponds to the beginning of the
thickening of the bulb. This parameter
is decisive in onion cultivation, since
the time of transplantation depends
on the thickness of the neck to
avoid the formation of bulbs of poor
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pseudotallo, por encima de los otros
consorcios probados y del control (sin
inocular). Por otro lado, los consorcios
Alf+ES1, ME01+Alf, y YE1+Alf, no
ejercieron ningún efecto sobre las
plántulas, ya que los valores en las
variables determinadas no muestran
diferencias signicativas respecto al
control no inoculado.
De estos consorcios destacó el
ME01+Leu2A, formado por una
cepa de Rhizobium tropici y una
cepa de Bradyrhizobium japonicum
respectivamente, por su efecto
positivo sobre el incremento de
todas las variables determinadas,
especialmente el diámetro de la base
del pseudotallo o cuello (incremento
de hasta 300 %), lo que signica el
comienzo del engrosamiento del bulbo.
Este parámetro es determinante en el
cultivo de cebolla, ya que el momento
del trasplante depende del grosor
del cuello para evitar la formación de
bulbos de mala calidad (Enciso et al.,
2019). Nuevos reportes han mostrado
efectos positivos sobre el incremento
de parámetros de crecimiento sobre
plántulas de cebolla inoculadas,
aunque de forma individual, con
cepas bacterianas de la especie
Bacillus megaterium y los géneros
Leifsonia sp. y Pantoea sp., las cuales
incrementaron los pesos fresco y seco
total, y las longitudes aérea y de raíz
a las 7 semanas de inoculadas y con
dosis 50 % de fertilizante, pero en este
mismo estudio los consorcios probados
no ejercieron ningún efecto sobre las
variables de crecimiento (Samayoa et
al., 2020), a diferencia de lo observado
en la presente investigación con el
consorcio ME01+Leu2A.
quality (Enciso et al., 2019). New
reports have shown positive effects on
the increase of growth parameters on
onion seedlings inoculated, although
individually, with bacterial strains
of the species Bacillus megaterium
and the genera Leifsonia sp. and
Pantoea sp., which increased the total
fresh and dry weights, and the aerial
and root lengths at 7 weeks after
inoculation and with a 50 % fertilizer
dose, but in this same study the tested
consortia did not exert any effect on
the growth variables (Samayoa et
al., 2020), unlike what was observed
in the present investigation with the
ME01 + Leu2A consortium.
The evaluation of these strains
in the form of a consortium made it
possible to determine among which
there was a synergistic effect, as
proposed by Blanco et al. (2018),
specically for the onion hybrid used.
Additionally, and in physiological
terms, it was possible to observe the
photosynthetic activity of the seedlings
of the ME01 + Leu2A consortium as a
measure of the good metabolic state
in the seedling phase for the onion at
60 days after sowing (gure 1). Table
4 shows the ecophysiological variables
calculated for the control treatments
(without inoculation) and the ME01 +
Leu2A consortium, from the equation
determined with the curves. However,
as it was not possible to establish
statistical comparisons between both
treatments from the curves, the ve
maximum values of CO
2
assimilation
in both treatments were compared
and signicant differences were
observed between them (p<0.05),
being greater for the consortium (13.2
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La evaluación de estas cepas
en forma de consorcio permitió
determinar entre cuáles hubo
un efecto sinérgico, como fue
Cuadro 3. Efecto de los consorcios sobre las variables evaluadas a nivel de semillero en
cebolla (Allium cepa).
Table 3. Effect of consortia on the evaluated variables at the seedbed level in onion (Allium
cepa).
Tratamientos
biológicos
Número
de hojas
Diámetro de
la base del
pseudotallo
(mm)
Longitud
total
(cm)
Longitud
aérea
(cm)
Longitud
raíz (cm)
Peso
fresco
raíz (g)
Peso fres-
co aéreo
(g)
Peso
seco raíz
(g)
Peso
seco
aéreo (g)
Control (sin
inocular)
3,47
d
0,80
d
27,6g 25,6
e
2,00
f
0,04
b
0,67
e
0,003
def
0,05
f
Alf+ES1 3,60
cd
1,15
d
29,1
f
g 26,4
de
2,70
ef
0,03
b
0,69
de
0,003
ef
0,05
ef
ME01+ES1 3,93
abc
2,27
bc
31,57
ef
29,5
bc
2,07
f
0,03
b
0,96
bc
0,002
f
0,06
cdef
ES1+Leu2A 3,93
abc
2,59
ab
31,97
def
29,03
cd
2,93
def
0,04
b
1,00
bc
0,003
def
0,07
bcde
Alf+Leu2A 3,93
abc
1,92
c
33,1
cde
30,03
abc
3,07
cde
0,07
a
1,04
bc
0,004
bcd
0,07
bcd
YE1+ES1 4,06
ab
2,26
bc
33,97
bcde
30,17
abc
3,80
abc
0,07
a
1,04
bc
0,005
abc
0,07
bcde
ME01+Alf 3,73
bcd
2,03
c
34,17
bcde
30,43
abc
3,73
bcd
0,09
a
0,90
cde
0,004
cde
0,06
def
YE1+Alf 3,47
d
2,09
c
34,7
bcd
30,84
abc
3,86
bcd
0,07
a
0,91
cd
0,005
bcde
0,06
def
ME01+YE1 4,13
a
2,27
bc
36,1
abc
31,3
abc
4,80
ab
0,06
a
1,16
ab
0,017
ab
0,15
ab
YE1+Leu2A 4,13
a
2,35
bc
36,13
ab
32,53
a
3,60
cd
0,06
a
1,36
a
0,004
bcde
0,09
a
ME01+Leu2A 4,00
ab
3,20
a
38,4
a
32,17
ab
6,23
a
0,07
a
1,18
ab
0,017
a
0,08
abc
a, b, c, d, e, f
Letras diferentes indican diferencias signicativas (p<0,05) para un nivel de conanza del 95 %.
a, b, c, d, e, f
Different letters indicate signicant differences (p <0.05) for a condence level of 95%.
± 0.2 μmol CO
2
.m
-2
.s
-1
) and lower for
th econtrol (11.5 ± 0.1 μmol CO
2
.m
-2
.s
-1
).
In turn, the CO
2
assimilation
rates (Table 3) are higher than those
314
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propuesto por Blanco et al. (2018),
especícamente para el híbrido de
cebolla utilizado.
Adicionalmente, y en términos
siológicos, se pudo observar
la actividad fotosintética de
las plántulas del consorcio
ME01+Leu2A como una medida
del buen estado metabólico en
fase de semillero para la cebolla a
los 60 días después de la siembra
(gura 1). En el cuadro 4 se
pueden observar las variables
ecosiológicas calculadas para los
tratamientos control (sin inocular)
y consorcio ME01+Leu2A, a
partir de la ecuación determinada
con las curvas. Sin embargo,
como no fue posible establecer
comparaciones estadísticas entre
ambos tratamientos a partir de las
curvas, se compararon los cinco
valores máximos de asimilación
de CO
2
en ambos tratamientos
y se observaron diferencias
signicativas entre ellos (p<0,05),
siendo mayores para el consorcio
(13,2 ± 0,2 μmol CO
2
.m
-2
.s
-1
) y
menores para el control (11,5 ± 0,1
μmol CO
2
.m
-2
.s
-1
). A su vez, las tasas
de asimilación de CO
2
(cuadro 3)
son superiores a las descritas para
plántulas de cebolla sin inocular en
otros estudios (Jasoni et al. 2004;
Bhatt et al. 2004; Bachie et al.
2019) y similares a las reportadas
por Wheeler et al. (2004), estas
últimas de un estado fenológico
más avanzado de las plantas y de
igual forma no inoculadas. Esto
sugiere que el consorcio microbiano
ME01+Leu2A podría producir
incremento de la biomasa en
described for onion seedlings without
inoculation in other studies (Jasoni et
al. 2004; Bhatt et al. 2004; Bachie et
al. 2019) and similar to those reported
by Wheeler et al. (2004), the latter of
a more advanced phenological state
of the plants and in the same way
not inoculated. This suggests that the
microbial consortium ME01 + Leu2A
could produce an increase in biomass
in onion plants compared to non-
inoculated plants, since a higher rate
of assimilation of CO
2
, together with
similar respiratory rates between
treatments, would lead to an increase
in the carbon availability for growth
and therefore a possible higher
yield of the onion in the eld. In this
regard, Castro and Blanco (2018)
determined that some of these same
microbial consortiums inoculated in
paprika plants favored chlorophyll
production and that this was related
to the foliar nitrogen content, thus
demonstrating the benets of PGPM
on photosynthetic capacity.
It should be mentioned that the
bacterial strains respond not only to
the characteristics and type of soil
(Reyes and Valery, 2007) or to the plant
species (Blanco et al., 2018), but also to
the variety of the same plant species
(Blanco and Reyes, 2018). In relation
to this approach, it was observed that
the use of some of the consortia used
in the present investigation, in paprika
plants, also yielded positive results,
the most promising consortium being
ME01 + YE1 (Castro and Blanco,
2018). Therefore, it was veried that
there is a strain-strain and strain-
culture specicity and compatibility, in
response to the plant-microorganism-
315
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plantas de cebolla en comparación
a plantas no inoculadas, puesto
que una mayor tasa de asimilación
de CO
2
, junto a tasas respiratorias
similares entre tratamientos,
conllevaría a un aumento en la
disponibilidad de carbono para el
crecimiento y por ende a un posible
mayor rendimiento de la cebolla
en campo. Al respecto, Castro y
Blanco (2018) determinaron que
algunos de estos mismos consorcios
microbianos inoculados en plantas
de pimentón favorecieron la
producción de clorola y que esto
estuvo relacionado con el contenido
de nitrógeno foliar, demostrando
así los benecios de los MPCV
sobre la capacidad fotosintética.
PPFD (mol m
-2
s
-1
)
0 250 500 750 1000 1250 1500 1750 2000
A (mol m
-2
s
-1
)
-4
-2
0
2
4
6
8
10
12
14
16
PPFD (mol m
-2
s
-1
)
0 250 500 750 1000 1250 1500 1750 2000
A (mol m
-2
s
-1
)
-4
-2
0
2
4
6
8
10
12
14
A (μmol
CO
2
m
-2
s
-
1
)
A (μmol CO
2.
m
-2
.s
-1
)
A (μmol CO
2.
m
-2
.s
-1
)
DFFF (μmol.m
-2
.s
-1
)DFFF (μmol.m
-2
.s
-1
)
Control (sin inocular) Consorcio ME01+Leu2A
Figura 1. Curvas de saturación de luz realizada a las plántulas a los 60 dds en
condiciones de umbráculo. Densidad de ujo fotónico fotosintético (DFFF) Vs. Tasa
de asimilación de CO
2
(A). Control (sin inocular): [A= 13,88*(-29,64+DFFF) / (-29,64+
269,07+DFFF); R
2
=0,986]. Consorcio ME01+Leu2A: [A= 14,65*(-32,01+DFFF) / (-32,01+
459,50+DFFF); R
2
=0,956].
Figure 1. Light saturation curves performed on the seedlings at 60 dds under shade
conditions. Photosynthetic photon ux density (DFFF) vs. CO
2
assimilation rate (A).
Control (uninoculated): [A = 13.88 * (- 29.64 + DFFF) / (-29.64+ 269.07 + DFFF); R
2
= 0.986].
Consortium ME01 + Leu2A: [A = 14.65 * (-32.01 + DFFF) / (-32.01+ 459.50 + DFFF); R
2
= 0.956].
soil interaction, according to the
biochemical, physiological and
ecological relationship between these
factors, due to the variety of radical
exudates that can be expressed, as
mentioned by Blanco et al. (2018).
However, the positive effect on plant
growth is common with the presence of
strain ME01, which individually also
promoted the growth of paprika and
lettuce seedlings (Blanco et al., 2018).
Similarly, the plant growth
promoting effect produced by the
ME01 + Leu2A consortium could be
due to the inorganic phosphate solubization
mechanisms and indole acetic acid
production shown by these same strains
(Marquina et al., 2018), to the nitrate
reductase activity of both strains, and
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Blanco et al. ISSN 2477-9407
Cabe mencionar que las cepas
bacterianas responden no solo a las
características y tipo de suelo (Reyes
y Valery, 2007) o a la especie vegetal
(Blanco et al., 2018), sino también a la
variedad de una misma especie vegetal
(Blanco y Reyes, 2018). Con relación a
este planteamiento, se pudo observar
que el uso de algunos de los consorcios
utilizados en la presente investigación,
en plantas de pimentón, también
arrojaron resultados positivos,
siendo el consorcio más promisorio el
ME01+YE1 (Castro y Blanco, 2018).
Por lo tanto, se comprobó que existe
una especicidad y compatibilidad
cepa-cepa y cepas-cultivo, en
respuesta a la interacción planta-
microorganismo-suelo, de acuerdo a
la relación bioquímica, siológica y
Cuadro 4. Variables fotosintéticas determinadas a partir de las
ecuaciones de las curvas de saturación de luz en plántulas con
60 dds en condiciones de umbráculo.
Table 4. Photosynthetic variables determined from the equations of the
light saturation curves in seedlings with 60 dds under shade
conditions.
Variable Unidades Control (sin inocular) Consorcio ME01+Leu2A
Punto de compensación
de luz
μmol.m
-2
.s
-1
29,6 32,0
Punto de saturación
de luz
μmol.m
-2
.s
-1
800 1200
A
max
μmol
CO
2
.m
-2
.s
-1
11,4
(11,5)
11,9
(13,2)
Eciencia cuántica - 0,037 0,034
Respiración en
oscuridad
μmol
CO
2
.m
-2
.s
-1
1,25 1,20
A
max
= tasa de asimilación de CO
2
máxima a una radiación de 2000 μmol.m
-2
.s
-1
; tasa máxima
absoluta entre paréntesis, n=5.
A
max
= maximum CO
2
assimilation rate at a radiation of 2000 μmol.m
-2
.s
-1
; absolute maximum
rate in parentheses, n = 5.
the urease activity of strain ME01
(Y. Castro and E.L. Blanco, personal
observations). Other studies have
shown the phytostimulant effect of
rhizobia to promote the growth of non-
legume plants, through the production
of phytohormones, siderophores,
inorganic phosphate solubilization, or
as biocontrol agents against
phytopathogens, thus highlighting
that rhizobia have a high bio-
fertilizing potential for horticultural
crops of commercial interest (García-
Fraile et al., 2012; Santillana et al.,
2012; Kumar et al., 2019; Borges et
al., 2019).
Likewise, the importance of
previously evaluating the strains
with the culture to be treated, and
taking into account the previous
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ecológica entre estos factores, debido
a la variedad de exudados radicales
que puedan expresarse, como lo
mencionaron Blanco et al. (2018). Sin
embargo, el efecto positivo sobre el
crecimiento vegetal es común con la
presencia de la cepa ME01, la cual de
forma individual también promovió el
crecimiento de plántulas de pimentón
y lechuga (Blanco et al., 2018).
Igualmente, el efecto promotor del
crecimiento vegetal producido por el
consorcio ME01+Leu2A pudo deberse
a los mecanismos de disolución de
fosfatos y producción de ácido indol
acético mostrados por estas mismas
cepas (Marquina et al., 2018), a
la actividad nitrato reductasa de
ambas cepas, y a la actividad ureasa
de la cepa ME01 (Y. Castro y E.L.
Blanco, observaciones personales).
Otros estudios han mostrado el efecto
toestimulante que presentan los
rizobios para promover el crecimiento
de plantas no leguminosas, mediante
la producción de tohormonas,
sideróforos, disolución de fosfatos,
o como agentes de biocontrol contra
topatógenos, destacando así que
los rizobios tienen una alto potencial
biofertilizante para cultivos hortícolas
de interés comercial (García-Fraile
et al., 2012; Santillana et al., 2012;
Kumar et al., 2019; Borges et al.,
2019).
Asimismo, se destaca la importancia
de evaluar previamente las cepas con
el cultivo a tratar, y tener en cuenta
la caracterización previa que debe
realizarse a cada microorganismo
para determinar su tolerancia a
temperaturas, pH y salinidad, además
de vericar el establecimiento de
characterization that must be
carried out on each microorganism
to determine its tolerance to
temperatures, pH and salinity,
in addition to verifying the
establishment of synergy with the
plant species. In this case, it is no
coincidence that the consortium that
best interacted with onion seedlings
is composed of two microorganisms
from soils in semi-arid areas such as
San Juan de Lagunillas and El Vigía,
with physical-chemical conditions
similar to those of the soil from which
the one used in this trial came from
(table 1), and with a wide range of
tolerance to temperatures, pH and
soil salinity (Marquina et al., 2011),
which would allow it to adapt to other
climatic conditions for the production
of the inoculum from the ME01 +
Leu2A consortium and its use in
other regions of the country.
In this way and in accordance
with Jayashree and Jagadeesh
(2017) and Blanco et al. (2018),
the use of microbial consortia that
promote plant growth is proposed
as an innovative approach for the
production of vigorous and healthy
seedlings with greater chances of
success after transplantation in crop
production, and that allows the
reduction of chemical fertilizers in
plant crops.
Conclusions
The microbial consortium ME01
+ Leu2A (Rhizobium tropici +
Bradyrhizobium japonicum) increases
or stimulates the greater growth
of onion seedlings reected in the
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sinergia con la especie vegetal. En
este caso, no es casualidad que el
consorcio que mejor interactuó con las
plántulas de cebolla, esté compuesto
por dos microorganismos provenientes
de suelos de zonas semiáridas como
San Juan de Lagunillas y El Vigía,
con condiciones físico químicas
similares a las del suelo de donde
provenía el que se usó en este ensayo
(cuadro 1), y con un amplio rango
de tolerancia a temperaturas, pH y
salinidad del suelo (Marquina et al.,
2011), que le permitiría adaptarse a
otras condiciones climáticas con nes
de producción del inóculo del consorcio
ME01+Leu2A y su uso en otras
regiones del país.
De esta forma y en concordancia
con Jayashree y Jagadeesh (2017) y
Blanco et al. (2018), se propone el uso
de consorcios microbianos promotores
del crecimiento vegetal como un
enfoque innovador para la producción
de plántulas vigorosas y saludables
con mayores posibilidades de éxito
luego de un trasplante en la producción
de hortalizas, y que permitan reducir
el uso de fertilizantes químicos en los
vegetales.
Conclusiones
El consorcio microbiano
ME01+Leu2A (Rhizobium tropici
+ Bradyrhizobium japonicum)
aumenta o estimula el mayor
crecimiento de las plántulas de
cebolla reejado en las variables
determinadas, especialmente en el
diámetro de la base del pseudotallo.
Por lo tanto, se propone como
un prototipo de biofertilizante
determined variables, especially in the
diameter of the base of the pseudostem.
Therefore, it is proposed as a prototype
of a promising biofertilizer for the
development of seedlings of this
plant species, and particularly when
transplanted to soils under conditions
of semi-arid climates and with physical-
chemical characteristics similar to
those shown in this research which are
more favorable for the cultivation of
this crop.
Recommendations
It is recommended to evaluate
this microbial consortium in onion
production at the eld level, and study
the positive effect that its application
may have on growth and physiological
variables, as well as on onion varieties
and on soils with physical-chemical
characteristics other than those
evaluated in the present investigation,
in such a way as to produce an inoculum
with a wide range of application.
Acknowledgement
The authors thank the technical staff
of the Laboratorio de Fitobiotecnología-
ULA for their collaboration in the
processing of plant samples, and the staff
in charge of the IIAP-ULA experimental
station in San Juan de Lagunillas,
Mérida, for allowing us to take the soil
samples for this essay. F. Rada thanks
the IIE (Institute for International
Education) and the Universidad de
Los Andes (UniAndes) in Colombia for
all the logistical and nancial support
provided.
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promisorio para el desarrollo
de plántulas de esta especie
vegetal, y que particularmente se
vayan a trasplantar a suelos bajo
condiciones de climas semiáridos y
con características físico químicas
similares a las mostradas en esta
investigación donde es más propicio
el cultivo de este rubro.
Recomendaciones
Se recomienda evaluar este
consorcio microbiano en la
producción de cebolla a nivel
de campo, y estudiar el efecto
positivo que sobre variables de
crecimiento y siológicas pueda
tener la aplicación del mismo, así
como en variedades de cebolla y
en suelos con características físico
químicas distintas a las evaluadas
en la presente investigación, de tal
manera de producir un inóculo con
amplio rango de aplicación.
Agradecimiento
Los autores agradecen al
personal técnico del Laboratorio
de Fitobiotecnología-ULA por su
colaboración en el procesamiento
de muestras vegetales, y al
personal encargado de la estación
experimental del IIAP-ULA en
San Juan de Lagunillas, Mérida,
por permitir la toma de muestras
del suelo para este ensayo. F.
Rada agradece al IIE (Institute
for International Education) y
a la Universidad de Los Andes
(UniAndes) en Colombia por todo el
apoyo logístico y nanciero otorgado.
Literatura citada
Alcedo, Y. e I. Reyes. 2018. Microorganismos
promotores de crecimiento en el
biocontrol de Alternaria alternata en
tomate (Solanum lycopersicum L.).
Bioagro. 30(1): 59-66.
Antoun, H. and D. Prévost. 2005. Ecology of
plant growth promoting rhizobacteria.
p. 1–38. In: PGPR: Biocontrol and
Biofertilization (ed. Z.A. Siddiqui).
Springer, The Netherlands.
Bachie, O.G., L.S. Santiago and M.E.
McGiffen. 2019. Physiological
responses of onion varieties to
varying photoperiod and temperature
regimes. Agriculture. 9: 214.
Bhatt, R.M., N.K.S. Rao and R.V. Gowda.
2004. Genotypic variability of
physiological responses to water
stress in onion (Allium cepa L.). Trop.
Agric. (Trinidad). 81(4): 248-252.
Blanco, E.L., M.E. Marquina y Y. Castro.
2013. Respuestas a la aplicación de
carbamatos en dos aislados rizobianos
provenientes de Mucuchíes, estado
Mérida, Venezuela. Bioagro. 25(2):
117-128.
Blanco, E.L., Y. Castro, A. Olivo, R.
Skwierinski y F. Moronta Barrios.
2018. Germinación y crecimiento
de plántulas de pimentón y lechuga
inoculadas con rizobios e identicación
molecular de las cepas. Bioagro. 30(3):
207-218.
Blanco, E.L. e I. Reyes. 2018. Aplicación
de un biosustrato compuesto por
microorganismos y roca fosfórica
sobre el cultivo de dos variedades de
lechuga (Lactuca sativa L.). Rev. Fac.
Agron. (LUZ). 35: 408-434.
Borges, C.S., E.L. Saccol de Sá, A.W. Muniz
and B.D. Osorio Filho. 2019. Potencial
use of Rhizobium for vegetable crops
growth promotion. Afr. J. Agric. Res.
14(8): 477-483.
Brom, S., M. Pistorio, D. Romero and G.
Torres-Tejerizo. 2014. Boundaries
for conjugative transfer of rhizobial
320
Esta publicación cientíca en formato digital es continuación de la Revista Impresa: Depósito legal pp 196802ZU42, ISSN 0378-7818.
Rev. Fac. Agron. (LUZ). 2021, 38: 301-321. Abril-Junio.
Blanco et al. ISSN 2477-9407
plasmids: restraining and releasing
factors. p. 43-54. In: Katsy, E.I. (Ed).
Plasticity in Plant-Growth-Promoting
and Phytopathogenic Bacteria.
Springer, Rusia.
Castro, Y. y E.L. Blanco. 2018. Estimación
del contenido de clorola y nitrógeno
en plantas de pimentón inoculadas
con bacterias rizosféricas. Revista
Cientíca UNET. 30(1): 105-112.
Enciso, C., P. Vera, A. Santacruz y J.
González. 2019. Guía técnica del
cultivo de cebolla. Proyecto Paquetes
Tecnológicos. Universidad Nacional
de Asunción. Paraguay. 73 p.
Estrada-Prado, W., E. Lescay-Batista, A.
Álvarez-Fonseca y Y.C. Maceo-
Ramos. 2015. Niveles de humedad
en el suelo en la producción de bulbos
de cebolla. Agron. Mesoam. 26(1): 111
-117.
Fatnassi, I.C., M. Chiboub, O. Saadani, M.
Jebara and S.H. Jebara. 2015. Impact
of dual inoculation with Rhizobium
and PGPR on growth and antioxidant
status of Vicia faba L. under copper
stress. C. R. Biologies. 338: 241–254.
Gangaraddi, V. and G.P. Brahmaprakash.
2018. Comparative evaluation of
selected formulations of a microbial
consortium. Mysore J. Agric. Sci.
52(2): 255-262.
García-Fraile, P., L. Carro, M. Robledo,
M.H. Ramírez-Bahena, J.D. Flores-
Félix, M.T. Fernández, P.F. Mateos,
R. Rivas, J.M. Igual, E. Martínez-
Molina, A. Peix and E. Velázquez.
2012. Rhizobium promotes non-
legumes growth and quality in
several production steps: Towards
and biofertilization of edible raw
vegetables healthy for humans. PLoS
One. 7(5): e38122.
InfoStat Statistical Software. 2002. InfoStat/
Profesional Versión 2.0. Estadística y
Diseño-F.C.A., Universidad Nacional
de Córdoba, Argentina.
Jasoni, R., Ch. Kane, C. Green, E. Pefey, D.
Tissue, L. Thompson, P. Payton and
P.W. Paré. 2004. Altered leaf and root
emissions from onion (Allium cepa L.)
grown under elevated CO
2
conditions.
Environ. Exp. Bot. 51: 273–280.
Jayashree, C. and K.S. Jagadeesh. 2017.
Testing the effect of the microbial
consortium on growth of vegetable
seedlings in a Farmer’s Nursery.
Int. J. Curr. Microbiol. App. Sci. 6(2):
1636-1639.
Kumar, A., V.S. Meena, P. Roy, Vandana
and R. Kumarli. 2019. Role of
Rhizobia for sustainable agriculture:
Lab to Land. p. 129-149. In: A.
Kumar, V. S. Meena (Eds.), Plant
Growth Promoting Rhizobacteria for
Agricultural Sustainability, Springer
Nature, Singapore.
Marquina, M.E., N.E. González y Y. Castro.
2011. Caracterización fenotípica y
genotípica de doce rizobios aislados
de diversas regiones geográcas de
Venezuela. Rev. Biol. Trop. 59(3):
1017-1036.
Marquina, M.E., Y. Ramírez, y Y. Castro.
2018. Efecto de bacterias rizosféricas
en la germinación y crecimiento del
pimentón Capsicum annuum L. var.
Cacique gigante. Bioagro. 30(1): 3-16.
Montgomery, D. 1991. Diseño y análisis
de experimentos. Editorial
Iberoamericana. 541 p.
Ministerio del Poder Popular para la
Agricultura y Tierras (MPPAT).
2017. Disponible en: http://censo.
agriculturaproductiva.gob.ve/. Fecha
de consulta: enero 2017.
Ochoa Carreño, D.C. y A. Montoya Restrepo.
2010. Consorcios microbianos: una
metáfora biológica aplicada a la
asociatividad empresarial en cadenas
productivas agropecuarias. Rev. Fac.
Cienc. Econ. 17(2): N56-M29.
Olmedo, C. 2003. Aspectos biotecnológicos
de las interacciones microorganismos
planta. p. 97-103. En: Albanesi, A.,
A. Anriquez, S. Luna, C. Kunst y
R. Ledesma (Eds.). Microbiología
Agrícola. Un aporte de la investigación
argentina. Universidad Nacional de
Santiago del Estero. Argentina.
Reyes, I. y A. Valery. 2007. Efecto de
la fertilidad del suelo sobre la
microbiota y la promoción del
crecimiento del maíz (Zea mays L.)
con Azotobacter spp. Bioagro. 19(3):
117-126.
321
Esta publicación cientíca en formato digital es continuación de la Revista Impresa: Depósito legal pp 196802ZU42, ISSN 0378-7818.
Rev. Fac. Agron. (LUZ). 2021, 38: 301-321. Abril-Junio.
Blanco et al. ISSN 2477-9407
Samayoa, B.E., F.T. Shen, W.A. Lai and
W.Ch. Chen. 2020. Screening and
assessment of potential plant growth-
promoting bacteria associated with
Allium cepa Linn. Microbes Environ.
35(2). 10 p.
Santillana, N., D. Zúñiga y C. Arellano. 2012.
Capacidad promotora del crecimiento
en cebada (Hordeum vulgare) y
potencial antagónico de Rhizobium
leguminosarum y Rhizobium etli.
Agrociencia Uruguay. 16(2): 11-17.
Statistical Graphics Corporation. 2002.
Statgraphics Plus Versión 5.1.
Taiz, L. and E. Zeiger. 2010. Plant Physiology.
Sinauer. Sunderland, MA, USA. 623
p.
Vincent, J. M. 1975. Manual práctico de
rizobiología. Editorial Hemisferio
Sur. Buenos Aires. 74 p.
Wang, J., R. Li, H. Zhang, G. Wei and Z. Li.
2020. Benecial bacteria activate
nutrients and promote wheat growth
under conditions of reduced fertilizer
application. BMC Microbiol. 20: 38.
Wheeler, T.R., A.J. Daymon, J.I.L. Morison,
R.H. Ellis and P. Hadley. 2004.
Acclimation of photosynthesis to
elevated CO
2
in onion (Allium cepa)
grown at a range of temperatures.
Ann. appl. Biol. 144: 103-111.
Yashaswini, Ch. and S. Vijay Kumar.
2016. Quorum sensing. Agrobios
Newsletter. 14(12): 120-121.
